[发明专利]共有轻链小鼠

说明书

提供了经遗传修饰的小鼠，其中所述小鼠不能重排和表达内源小鼠免疫球蛋白轻链可变序列，其中所述小鼠仅表达在内源小鼠K基因座处与小鼠κ(K)恒定基因可操作连接的由人免疫球蛋白序列编码的一种或两种人轻链可变结构域，其中所述小鼠表达反向嵌合抗体，所述反向嵌合抗体具有源自仅有的两种人轻链可变区基因区段之一的轻链可变结构域和小鼠K恒定结构域，以及人重链可变结构域和来自内源小鼠重链基因座的小鼠重链恒定结构域。提供了完全为人的双特异性表位结合蛋白，其包括与相同的轻链缔合的两个不同的重链，所述轻链包含源自两种不同的人轻链可变区基因区段之一的可变结构域。

本申请是2011年2月8日提交的同名发明专利申请201180013714.0的分案申请。

发明领域

提供了经遗传修饰的小鼠，其表达具有与多种人可变/小鼠恒定重链缔合的共有人可变/小鼠恒定轻链的抗体。提供了从小鼠B细胞的人可变区基因序列制备人双特异性抗体的方法。

背景技术

抗体通常包含同二聚重链组分，其中每个重链单体与相同的轻链缔合。需要具有异二聚重链组分的抗体(例如双特异性抗体)作为治疗性抗体。但是已证明了，制备具有能够满意地与双特异性抗体的每个重链缔合的合适的轻链组分的双特异性抗体是有问题的。

在一种方案中，可通过调查所有轻链可变结构域的使用统计学、鉴别出人抗体中最常采用的轻链来选择轻链，并在体外将那种轻链与不同特异性的两个重链进行配对。

在另一种方案中，可通过观察噬菌体展示文库(例如，包含人轻链可变区序列的噬菌体展示文库，例如人ScFv文库)中的轻链序列并从所述文库中选择最常使用的轻链可变区而选择轻链。然后，可在两种不同的目的重链上测试所述轻链。

在另一种方案中，可通过使用两种目的重链的重链可变序列作为探针来测定轻链可变序列的噬菌体展示文库而选择轻链。与两种重链可变序列都缔合的轻链可被选作用于所述重链的轻链。

在另一种方案中，可将候选轻链与重链的共有轻链进行比对，并在所述轻链中进行修饰以更紧密地匹配两种重链的共有轻链共同的序列特征。如果需要使得免疫原性的机会最小化，则所述修饰优选产生在已知人轻链序列中存在的序列，从而基于评估免疫原性可能性的领域中已知的参数和方法(即计算机模拟和湿测定)，蛋白水解加工不太可能产生T细胞表位。

所有上述的方案都依赖于体外方法，其包含若干事先的约束，例如序列同一性，与特定的、预先选择的重链相缔合的能力等。本领域中需要这样的组合物和方法，其不依赖于操控体外条件，而是采用更为生物学上可感知的方案，来制备包括共有轻链的人表位结合蛋白。

附图说明

图1描绘了用人Vκ1-39Jκ5基因区域替换内源小鼠免疫球蛋白轻链可变区基因区段的靶向策略。

图2描绘了用人Vκ3-20Jκ1基因区域替换内源小鼠免疫球蛋白轻链可变区基因区段的靶向策略。

图3描绘了用人VpreB/Jλ5基因区域替换内源小鼠免疫球蛋白轻链可变区基因区段的靶向策略。

发明概述

提供了表达人免疫球蛋白重链和轻链可变结构域的经遗传修饰的小鼠，其中小鼠具有有限的轻链可变集合(repertoire)。提供了用于产生人轻链可变结构域的生物学系统，其中所述人轻链可变结构域与众多集合的亲和-成熟的人重链可变结构域相缔合并一起表达。提供了用于制备包含免疫球蛋白可变结构域的结合蛋白的方法，所述方法包括用目的抗原免疫接种具有有限的免疫球蛋白轻链集合的小鼠，和在特异性结合所述目的抗原的结合蛋白中采用小鼠的免疫球蛋白可变区基因序列。所述方法包括下列方法：用于制备适于在制备多特异性抗原结合蛋白中使用的人免疫球蛋白重链可变结构域的方法。