[发明专利]一种茶树嫩芽内源激素含量的测定方法

权利要求书

1.一种茶树嫩芽内源激素含量的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)样品收集冷冻与预处理；

2)配置流动相及设置色谱条件；

3)配置标准溶液并建立回归方程；

4)样品待测溶液检测；

所述流动相由甲醇与0.075％冰乙酸溶液组成；所述标准溶液包括IAA标准液、ZT标准液、ABA标准液和GA₃标准液。

2.根据权利要求1所述的茶树嫩芽内源激素含量的测定方法，其特征在于：步骤2)所述色谱条件为流速0.7mL/min，检测波长210nm和254nm，柱温25℃，进样量20μL。

3.根据权利要求1所述的茶树嫩芽内源激素含量的测定方法，其特征在于：步骤2)所述流动相的配置方法为：再将甲醇与0.075％冰乙酸溶液分别进行抽滤及超声波震动30min，按体积比为45:55配制流动相。

4.根据权利要求1所述的茶树嫩芽内源激素含量的测定方法，其特征在于：步骤3)所述标准溶液包括0.1g/L的IAA标准液、0.001g/L的ZT标准液、0.001g/L的ABA标准液和0.01g/L的GA₃标准液。

5.根据权利要求1所述的茶树嫩芽内源激素含量的测定方法，其特征在于：步骤1)所述样品收集冷冻的具体方法为：采集茶树嫩芽样品，置于液氮中5min后放入冰箱冷冻保存。

6.根据权利要求1所述的茶树嫩芽内源激素含量的测定方法，其特征在于：步骤1)所述样品预处理的具体方法为：

1-1)浸提：称取冷冻的茶树嫩芽样品，加入80％冷甲醇研磨，置于4℃下静置16h后，抽滤得粗提液；

1-2)一次萃取：将步骤1-1)所得粗提液用等量石油醚萃取，弃去醚相，保留水相；

1-3)旋转蒸发：将步骤1-2)所得水相在37℃下旋转蒸发至溶液体积的1/4至1/5；

1-4)调节pH：将步骤1-3)所得旋蒸浓缩液调节pH至8.0，加入PVP，过滤，用0.3mol/L酒石酸溶液调节pH至3.5；

1-5)二次萃取：将调好pH值的溶液用等量乙酸乙酯萃取，收集水相，合并酯相；

1-6)酯相收集：将步骤1-5)所得酯相在37℃下旋转蒸干，溶解于甲醇，通过0.45μm滤膜抽滤，滤液保存于4℃下棕色瓶中，待测；

1-7)水相收集：将步骤1-5)所得的水相调节pH至8.0，用等量饱和正丁醇萃取得有机相，在60℃下旋转蒸发，溶解于甲醇，离心，滤液保存于4℃下棕色瓶中，待测。

7.根据权利要求1所述的茶树嫩芽内源激素含量的测定方法，其特征在于：所述建立回归方程的具体方法为：在相应的色谱条件下分别测定所述标准溶液，用保留时间对标准溶液进行定性判定；将所述标准液配制成系列浓度梯度的标准混合液并进行检测，以混合标准液峰面积与其质量浓度进行线性回归分析；以峰面积为纵坐标，以各进样浓度为横坐标，得到相应的标准溶液的线性回归方程。

8.根据权利要求7所述的茶树嫩芽内源激素含量的测定方法，其特征在于：所述系列浓度梯度的标准混合溶液的具体配制方法为：根据混合后的标准混合溶液的总体积和其中各组分的最终浓度，得出各标准溶液所需量，将配置好的标准溶液进行混合，制成标准混合溶液后进行检测，根据结果制成标准曲线。

9.根据权利要求7所述的茶树嫩芽内源激素含量的测定方法，其特征在于：样品待测溶液检测后，进行重现性和精密度的检验：取同一批次茶树嫩芽样品待测溶液，加入已知浓度的混合标准溶液后，测定其中的内源激素含量，计算加标回收率。

10.根据权利要求1至9任一所述的茶树嫩芽内源激素含量的测定方法，其特征在于：所述标准溶液和样品待测溶液在进行测定前均需用0.45μm滤膜过滤。