[发明专利]壳寡糖在制备疫苗佐剂及疫苗组合物中的用途

说明书

本发明公开了壳寡糖在制备疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂中的用途，所述疫苗佐剂包含壳寡糖，所述壳寡糖由以下方法制备：壳聚糖经生物酶法水解、化学法降解或物理方法裂解生成聚合度为2‑20的壳寡糖；所述聚合度为2‑20的壳寡糖脱乙酰度>90％，分子量范围为400～5000Da，其中聚合度为3‑10的成分比例之和不低于50％。本发明的含壳寡糖的疫苗佐剂可以用作减毒疫苗、灭活疫苗、核酸疫苗、多肽疫苗或蛋白质疫苗的佐剂。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体地，本发明涉及壳寡糖在制备疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂中的用途。

背景技术

佐剂是一类先于抗原或与抗原同时应用时能增强抗原免疫效应的物质，它的作用主要是增强机体免疫系统对抗原的特异性免疫应答反应。自200多年前英国医生Jenner接种牛痘预防天花并取得了人体试验成功，人类可以通过接种疫苗预防控制某些传染性疾病。1925年法国免疫学家兼兽医学家Gaston Ramon发现在白喉、破伤风疫苗中加入木薯淀粉、琼脂、化脓性细菌等某些与抗原无关的物质可以特异性地增强机体对白喉和破伤风毒素的抵抗力。在此后的疫苗佐剂的研究中发现许多物质均具有佐剂效应，如木薯粉、羊毛脂、丹宁酸等。近年来，随着人们对免疫佐剂研究的不断深入，越来越多的物质被发现有免疫佐剂的功能，如铝盐佐剂、油乳佐剂、蜂胶佐剂、多糖佐剂、新型免疫佐剂等(Biomolecular Engineering,2001,18(3):69-85.)。油乳佐剂主要有油包水乳剂的弗氏佐剂(FA)、水包油乳剂的MF-59等。新型免疫佐剂有脂质体、细胞因子佐剂等。至今被我国批准合法使用的人用疫苗佐剂是铝盐佐剂，它可以有效地诱导免疫反应，显著增强机体的体液免疫应答(Arch Virol，2008，153(5):831－837.)。然而，铝佐剂只能增强机体的体液免疫功能，对于如HIV等胞内病毒无法产生有效的细胞免疫促进作用。其次，铝佐剂主要以氢氧化铝和磷酸铝为代表，在注射部位产生红肿、结节等局部反应，铝盐还易在体内蓄积，特别是脑部，有可能导致脑病的发生。传统兽用疫苗中常用的佐剂有铝盐佐剂和油佐剂。油佐剂疫苗在抗体效价和免疫持久性方面都优于铝盐佐剂疫苗，但油佐剂不良反应严重，皮下注射会引起炎症、溃疡和肉芽肿；油类物质长期潴留于组织中不易代谢。

随着免疫学研究的不断深入和基因工程技术的迅速发展，针对不同疾病已开展了各种新型基因工程疫苗的研制，新型技术疫苗如抗原表位疫苗、基因工程疫苗等抗原纯度越来越高，但这些疫苗普遍存在分子小、免疫原性弱、难以诱导机体产生有效免疫应答等不足，从而需要免疫佐剂来协同这种作用，尤其是安全无毒、能够刺激较强细胞免疫应答的佐剂，以及适合粘膜疫苗、核酸疫苗和肿瘤疫苗的免疫佐剂。理想的疫苗佐剂应当具有以下特征：对于特定的人群或动物，要保证副作用最小；佐剂作用要持久稳定；生产成本要尽量低；增强细胞或体液免疫的强度要能达到保护要求；不同用药途径产生的毒副作用都应清楚研究。

壳寡糖分子量小，水溶性良好，易被人体吸收，生物活性高，具有大分子糖所不具备的更独特的生理生化活性，同时具有纯天然、无辐射、无污染等特点，在保健品、营养剂、食品添加剂等食品工业方面，植物生长调节剂及饲料添加剂等农牧业方面，废水处理、纺织、化工、日用化学品、生物工程和医药等方面具有良好的应用价值，更为值得关注的是它能够有效激活机体细胞免疫和体液免疫，将其开发为疫苗佐剂具有良好的应用前景。

壳寡糖的制备主要有化学法、物理降解法、酶法、糖基转移法(中国生化药物杂志，1999，20(2)：99)。化学法一般用浓盐酸水解，但其产品多在四糖以下，而且化学反应条件十分苛刻，不易控制，后处理也繁琐。糖基转移法是利用低聚合度寡糖，在酶(主要是溶菌酶或几丁质酶)的参与后，延长糖链成为高聚合度的寡糖，此方法主要得到六糖和七糖。酶降解法所用的酶有壳聚糖酶、纤维素酶、糖苷酶和脂肪酶等，对其聚合度无法控制。而不同聚合度的壳寡糖对其佐剂活性有影响。目前所能制备得到的非常有限的寡糖价格昂贵，其在应用上受到很大的限制。

发明内容

本发明的目的在于，提供壳寡糖在制备疫苗佐剂及含该疫苗佐剂的疫苗组合物和疫苗制剂中的用途。