[发明专利]一种用珍贵橙色束丝放线菌制备安丝菌素P-3的方法

权利要求书

1.一种从珍贵橙色束丝放线菌制备安丝菌素P-3的方法，步骤如下：

(1)孢子培养：将在20％甘油管冷冻保存的束丝放线菌孢子在固体培养基培养皿划线培养，25～30℃培养3～9天，至生长出丰富孢子；

(2)种子培养：从培养皿刮取孢子，接种于液体种子培养基在25～30℃进行培养30～50h，获得种子液；

(3)发酵培养：取培养好的种子液接种于液体发酵培养基，于25～30℃发酵培养，溶氧控制20％以上，发酵持续时间350～450h；

步骤(1)中所述束丝放线菌为珍贵橙色束丝放线菌ATCC31565(Actinosynnema pretiosum ATCC31565)；所述固体培养基组分为酵母提取物0.1～5％，大豆蛋白胨0.3～1.0％、麦芽浸膏0.1～0.5％，甘油0.5～1.5％，琼脂粉1.5～2.2％，自然pH，均为重量百分比；

步骤(2)中所述的液体种子培养基组分为玉米淀粉1～5％，酵母粉0.5～2％，大豆蛋白胨0.5～2％，pH为7.0～8.0，均为重量百分比；

步骤(3)中所述的液体发酵培养基组分为玉米淀粉5％，玉米浆干粉2％，热榨豆饼粉2％，葡萄糖0.5％，K₂HPO₄·3H₂O 0.025％，MgSO₄·7H₂O 0.3％，CaCO₃ 0.4％，CaCl₂ 0.1％，异丁醇0.3％，CoCl₂·6H₂O 0.0005％，FeSO₄·7H₂O 0.0002％，pH为7.2；均为重量百分比；

步骤(3)中当种子液接种液体发酵培养基后开始补加浓度为20～25％的葡萄糖溶液，流速0.4～0.5mL/L/h，发酵至60h后补加含有20～30％的葡萄糖和5～15％热榨豆饼粉，流速0.8～1.2mL/L/h，同时，开始添加异丁醇，添加方式为每24h每升发酵液一次性添加1.8～2.0mL，直至发酵结束。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的孢子是在培养温度为27～29℃条件下，于固体培养基培养皿倒置培养4～8天后制得的；所述培养皿直径90mm，所装培养基15～20mL。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中的培养温度为27.5～28.5℃，培养时间为30～40h。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(2)中的培养温度为27.5～28.5℃，培养时间为34～38h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中所述的种子液按8～12％的接种量接种到液体发酵培养基进行发酵培养，发酵培养温度为28℃，溶氧控制在30％以上，发酵时间为400～432h。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：发酵至60h后补加的葡萄糖浓度为23～27％，热榨豆饼粉的浓度为8～12％，异丁醇添加方式为每24h每升发酵液一次性添加1.8～2mL。