[发明专利]一种神经外科手术后颅内细菌性感染常见致病细菌MLPA检测探针及其应用有效
| 申请号： | 201510361873.X | 申请日： | 2015-06-26 |
| 公开（公告）号： | CN105018601B | 公开（公告）日： | 2018-07-20 |
| 发明（设计）人： | 王明席;李云振;王庆波;姜涛 | 申请（专利权）人： | 华侨大学;厦门柏嘉生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/14;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 厦门市首创君合专利事务所有限公司 35204 | 代理人： | 张松亭 |
| 地址： | 362000*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 神经 外科手术 后颅内 细菌性 感染 常见 致病 细菌 mlpa 检测 探针 及其 应用 | ||
1.一种神经外科手术后颅内细菌性感染常见致病细菌MLPA检测探针，其特征在于：包括第一组探针至第十七组探针，依序为检测脑膜炎奈瑟氏菌、绿脓假单胞菌、沙门氏菌属、嗜麦芽寡养单胞菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、克雷伯氏肺炎菌、粘质沙雷氏菌、鲁氏不动杆菌、白喉杆菌、缓症链球菌、鲍氏不动杆菌、肺炎链球菌、痤疮丙酸杆菌、李斯特氏菌、阴沟肠杆菌和流感嗜血杆菌的探针，每组探针分别由左侧探针LPO和右侧探针RPO组成，所述左侧探针由杂交序列和连接在杂交序列5’端的如SEQ ID NO 37所示的上游通用引物序列组成，所述右侧探针由杂交序列、连接在杂交序列5’端的如SEQ ID NO 35所示的BsmI酶切位点序列、连接在杂交序列3’端的EcoR V酶切位点序列GATATC以及连接在EcoR V酶切位点序列3’端的SEQ ID NO 38的反向互补序列组成，其中，
第一组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 1所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 2所示；
第二组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 3所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 4所示；
第三组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 5所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 6所示；
第四组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 7所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 8所示；
第五组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 9所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 10所示；
第六组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 11所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 12所示；
第七组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 13所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 14所示；
第八组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 15所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 16所示；
第九组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 17所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 18所示；
第十组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 19所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 20所示；
第十一组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 21所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 22所示；
第十二组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 23所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 24所示；
第十三组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 25所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 26所示；
第十四组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 27所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 28所示；
第十五组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 29所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 30所示；
第十六组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 31所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 32所示；
第十七组探针的左侧探针LPO的杂交序列如SEQ ID NO 33所示，右侧探针RPO的杂交序列如SEQ ID NO 34所示。
2.一种神经外科手术后颅内细菌性感染常见致病细菌MLPA检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的探针。
3.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于：还包括一对通用引物，所述通用引物的上游引物和下游引物分别如SEQ ID NO 37和SEQ ID NO 38所示。
4.如权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于：还包括Ligase-65、Ligase buffer、Probe Mix和PCR Primer Mix，其中，
Ligase-65的配方为：1U/μL，其储存液为pH 7.5的20mM Tris，50mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA和50％(v/v)甘油；
Ligase buffer的配方为：10×Ligation Buffer：pH 7.8的400mM Tris，100mM MgCl2，100mM DTT，5mM ATP；
Probe Mix的配方为：每个探针的浓度为4fM，工作液为pH 8.0的10mM Tris-Cl，1mMEDTA；
PCR Primer Mix的配方为：含有所述通用引物的上游引物和下游引物，dNTPs 2.5mM；工作液为pH 8.0的10mM Tris-Cl，1mM EDTA；每个引物的浓度为10pM，上游引物为Cy 5.0标记。
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