[发明专利]一种神经外科手术后颅内细菌性感染常见致病细菌MLPA检测探针及其应用

说明书

本发明公开了一种神经外科手术后颅内细菌性感染常见致病细菌MLPA检测探针及其应用，该探针包括第一组探针至第十七组探针，依序为检测脑膜炎奈瑟氏菌、绿脓假单胞菌、沙门氏菌属、嗜麦芽寡养单胞菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、克雷伯氏肺炎菌、粘质沙雷氏菌、鲁氏不动杆菌、白喉杆菌、缓症链球菌、鲍氏不动杆菌、肺炎链球菌、痤疮丙酸杆菌、李斯特氏菌、阴沟肠杆菌和流感嗜血杆菌的探针。本发明依据MLPA技术研发，能一次、快速诊断神经外科手术后颅内细菌性感染17种常见致病细菌，为此类病人致病菌的快速诊断提供了可能，有助于降低此类感染的致死率和致残率。

技术领域

本发明属于病原微生物检测技术领域，具体涉及一种神经外科手术后颅内细菌性感染常见致病细菌MLPA检测探针及其应用。

背景技术

神经外科手术后颅内细菌性感染最常表现为脑膜炎、硬膜下积脓症或脑脓肿。国外报道颅内感染死亡率为27.4％～35％[42,43]。国内学者报道，重症神经外科手术后颅内细菌性感染死亡率可高达57％[44]。

神经外科手术后颅内细菌性感染有几十种致病细菌，常见的有近20种，来自近10个不同细菌属。大多数为革兰氏阳性菌，其中最常见的病菌是金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌(分别可占31％和37％)，其次为链球菌属和疮疱丙酸杆菌(各占近10％)，多为皮肤性菌群；而革兰氏阴性菌中，肠杆菌属和不动杆菌属为主要病原菌(分别可占近10％)。此外，绿脓假单胞菌和克雷伯氏肺炎菌是较常见的革兰氏阴性致病菌，该类病菌主要来自呼吸道和肠道[45]。而国内外有关神经外科手术后颅内细菌性感染的流行病学和微生物学特征研究结果大致与之类[46]，见表1。

以PCR技术为代表的核酸检测技术多年来已经应用到感染的致病微生物诊断。与传统检测方法相比，核酸检测技术应用诊断神经外科手术后细菌性感染具有很多优势。首先，核酸检测技术无需细菌的培养分离，只需提取DNA，甚至可直接进行检测，可大大提高检测速度；其次，核酸检测技术具有非常高的特异性和灵敏度(理论上可检测一个细胞)，在保证检测准确性的前提下，大大提高了颅内细菌性感染的阳性检出率；再者，核酸检测技术不仅不受抗生素使用的影响，还可检测致病菌抗生素耐药基因，指导医生用药。常用的核酸检测技术主要包括荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization，FISH)、聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)、实时定量PCR(Real-time PCR)、广谱PCR(Broad range PCR)、多重Real time PCR、微阵列芯片(Microarray)和测序(Sequencing)。其中，从检测特异性、敏感性和检测速度等几个方面讲，实时定量PCR仍然目前是用于脑脊液样本中致病菌检测最为理想的技术。然而，此技术检测通量较低，最多只能同时检测8种致病菌，漏诊率高。理论上讲，尽管微阵列芯片和测序技术可以实现大多数致病菌的同时检测，但是这些技术都涉及大量数据的复杂分析，需要具有专业技能的人员。总之，目前，临床上还没有一次性诊断的神经外科开颅手术后颅内细菌性感染8以上种致病菌的试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种神经外科手术后颅内细菌性感染常见致病细菌MLPA检测探针及其应用。

本发明的具体技术方案如下：

一种神经外科手术后颅内细菌性感染常见致病细菌MLPA检测探针，包括第一组探针至第十七组探针，依序为检测脑膜炎奈瑟氏菌、绿脓假单胞菌、沙门氏菌属、嗜麦芽寡养单胞菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、克雷伯氏肺炎菌、粘质沙雷氏菌、鲁氏不动杆菌、白喉杆菌、缓症链球菌、鲍氏不动杆菌、肺炎链球菌、痤疮丙酸杆菌、李斯特氏菌、阴沟肠杆菌和流感嗜血杆菌的探针，每组探针中分别含有左侧探针LPO和右侧探针RPO：

第一组探针的左侧探针LPO含有SEQ ID NO 1所示序列，右侧探针RPO含有SEQ IDNO 2所示序列；