[发明专利]一种溶解养殖池塘颤藻的蜡样芽孢杆菌制剂的工业化液体—固体复合发酵方法

权利要求书

1.一种溶解养殖池塘颤藻的蜡样芽孢杆菌制剂的工业化液体—固体复合发酵方法，其特征是包括以下步骤：

(1)确定蜡样芽孢杆菌CZBC1液体发酵的液体培养基和固体发酵的固体培养基；

(2)菌种活化培养：将保种的蜡样芽孢杆菌CZBC1菌种进行活化培养；

(3)扩大培养：将活化好的蜡样芽孢杆菌CZBC1菌种进行扩大培养，得种子液；

(4)液体发酵：将种子液接种到装有步骤(1)中确定的液体培养基中进行液体发酵培养至芽孢数量达到10¹⁰个/mL以上，得液体发酵后的种子液；

(5)固体发酵：将步骤(4)获得的液体发酵后的种子液接种至步骤(1)中确定的固体培养基中进行固体发酵培养至芽孢数量达到10⁹个/g以上，且芽孢获得率达到90％以上，得固体发酵物；

(6)干燥、粉碎和包装：将步骤(5)获得的固体发酵物经包括干燥、粉碎和包装工序处理后，即制得溶解养殖池塘颤藻的蜡样芽孢杆菌制剂。

2.根据权利要求1所述的溶解养殖池塘颤藻的蜡样芽孢杆菌制剂的工业化液体—固体复合发酵方法，其特征是：步骤(1)中确定的蜡样芽孢杆菌CZBC1液体发酵的液体培养基为在1L水中包括葡萄糖8～10g、玉米淀粉8～10g、酵母膏12～15g、氯化钠4～7g，pH为7.2～7.5。

3.根据权利要求1所述的溶解养殖池塘颤藻的蜡样芽孢杆菌制剂的工业化液体—固体复合发酵方法，其特征是：步骤(1)中确定的蜡样芽孢杆菌CZBC1固体发酵的固体培养基由以下质量份配比的原料制成：麸皮58～70、豆粕18～25、玉米淀粉2.3～3.5、葡萄糖0.8～1.0、酵母粉1.2～1.5、磷酸二氢钾0.15～0.25、硫酸镁0.04～0.06、碳酸钙1.5～2.0，pH为7.2～7.8。

4.根据权利要求1所述的溶解养殖池塘颤藻的蜡样芽孢杆菌制剂的工业化液体—固体复合发酵方法，其特征是：步骤(2)中将保种的蜡样芽孢杆菌CZBC1菌种进行活化培养时，培养基为营养肉汤固体培养基，营养肉汤固体培养基的pH为6.50～7.20，28～30℃活化培养18～24h。

5.根据权利要求1所述的溶解养殖池塘颤藻的蜡样芽孢杆菌制剂的工业化液体—固体复合发酵方法，其特征是：步骤(3)中将活化好的蜡样芽孢杆菌CZBC1菌种进行扩大培养时，培养基为营养肉汤液体培养基，营养肉汤液体培养基的pH值为6.50～7.20，28～30℃恒温振荡培养18～24h，转速为180～230rpm。

6.根据权利要求1所述的溶解养殖池塘颤藻的蜡样芽孢杆菌制剂的工业化液体—固体复合发酵方法，其特征是：步骤(4)中液体发酵培养时间为18～28h，温度28～30℃。

7.根据权利要求1所述的溶解养殖池塘颤藻的蜡样芽孢杆菌制剂的工业化液体—固体复合发酵方法，其特征是：步骤(4)中液体发酵培养后，取样进行实验室显微镜检查，确认菌种未受杂菌污染，再将获得的液体发酵后的种子液接种至步骤(1)中确定的固体培养基中。

8.根据权利要求1所述的溶解养殖池塘颤藻的蜡样芽孢杆菌制剂的工业化液体—固体复合发酵方法，其特征是：步骤(5)中固体发酵培养采用压力脉动固态发酵反应器，压力脉动发酵的参数为：充压2.5～3.5min，谷压0.03～0.04MPa，维持9～11min峰压0.25～0.30MPa维持19～21min，发酵时间为26～30h，发酵温度为28～30℃。

9.根据权利要求1所述的溶解养殖池塘颤藻的蜡样芽孢杆菌制剂的工业化液体—固体复合发酵方法，其特征是：步骤(6)中干燥采用流化床干燥，将固体发酵物置于流化床65～70℃烘干至水分10％以下。

10.根据权利要求1所述的溶解养殖池塘颤藻的蜡样芽孢杆菌制剂的工业化液体—固体复合发酵方法，其特征是：步骤(6)中粉碎时粉碎机的孔径为60～100目；包装采用防潮铝箔袋进行真空密封包装。