[发明专利]丝状真菌基因组的提取方法在审
| 申请号： | 201510364596.8 | 申请日： | 2015-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN104946628A | 公开（公告）日： | 2015-09-30 |
| 发明（设计）人： | 张春晓;韩梁彦;王丽丽 | 申请（专利权）人： | 河北科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12R1/82;C12R1/685;C12R1/885;C12R1/80 |
| 代理公司： | 石家庄旭昌知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 13126 | 代理人： | 彭随丽 |
| 地址： | 050000 河*** | 国省代码： | 河北;13 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 丝状 真菌 基因组 提取 方法 | ||
1.一种丝状真菌基因组的提取方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
a、获取丝状真菌菌丝；
b、加入酶液：向丝状真菌菌丝加入蜗牛酶和纤维素酶的混合酶液，得到丝状真菌菌丝液；
c、超声处理：将步骤b获得的丝状真菌菌丝液于40~70W超声5~15min；
d、酶解：将步骤c处理后的丝状真菌菌丝液在25~40℃酶解10~15h，得到丝状真菌菌丝酶解液；
e、将丝状真菌菌丝酶解液静置，待丝状真菌菌丝酶解液分层后，获得供PCR鉴定用含有丝状真菌基因组的上清液；
在步骤a与步骤b之间或步骤d与步骤e之间，设有对丝状真菌菌丝或丝状真菌菌丝酶解液进行高温加热处理步骤，所述高温加热处理步骤中的加热温度为75~100℃，加热时间为5~15min。
2.根据权利要求1所述的丝状真菌基因组的提取方法，其特征在于：所述高温加热处理步骤中的加热温度为95~98℃，加热时间为10~15min。
3.根据权利要求1所述的丝状真菌基因组的提取方法，其特征在于：所述步骤e中丝状真菌菌丝酶解液静置前，用双蒸水稀释，混匀。
4.根据权利要求1所述的丝状真菌基因组的提取方法，其特征在于：所述步骤b每0.05~0.1mg丝状真菌菌丝加入混合酶液1mL，所述混合酶液中蜗牛酶浓度4~8mg/mL，纤维素酶浓度2000~6000U/mL。
5.根据权利要求4所述的丝状真菌基因组的提取方法，其特征在于：所述混合酶液中蜗牛酶浓度6~8mg/mL，纤维素酶浓度2000~4000U/mL。
6.根据权利要求1所述的丝状真菌基因组的提取方法，其特征在于：所述步骤b混合酶液的配制溶剂为渗透剂，所述渗透剂为0.7mol/L的NaCl溶液、1mol/L山梨醇溶液或裂解液中的一种，所述裂解液为50mM磷酸缓冲液，0.7mol/L KCl，pH5.8的溶液。
7.根据权利要求1所述的丝状真菌基因组的提取方法，其特征在于：所述步骤c的超声功率为50W。
8.根据权利要求1所述的丝状真菌基因组的提取方法，其特征在于：所述步骤d的酶解温度为28℃，酶解时间为14h。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的丝状真菌基因组的提取方法，其特征在于：所述丝状真菌为产黄青霉菌、黑曲霉菌、里氏木霉菌或桔青霉菌中的一种。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于河北科技大学，未经河北科技大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201510364596.8/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
