[发明专利]AS-PCR法检测抗嘧菌酯柑橘褐斑病菌的引物对和方法在审
申请号: | 201510364730.4 | 申请日: | 2015-06-25 |
公开(公告)号: | CN104946767A | 公开(公告)日: | 2015-09-30 |
发明(设计)人: | 符雨诗;李红叶 | 申请(专利权)人: | 浙江大学 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
代理公司: | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人: | 沈自军 |
地址: | 310027 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | as pcr 检测 抗嘧菌酯 柑橘 褐斑 病菌 引物 方法 | ||
1.引物对,包括上游引物和下游引物,其特征在于,上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种包含权利要求1所述引物对的AS-PCR法检测试剂盒。
3.如权利要求1所述的引物对在AS-PCR法检测抗嘧菌酯柑橘褐斑病菌中的应用。
4.一种检测抗嘧菌酯柑橘褐斑病菌的方法,包括以下步骤:
(1)提取待测菌株的DNA;
(2)以提取的DNA为模板,利用权利要求1所述的引物对进行AS-PCR扩增;
(3)AS-PCR扩增产物进行凝胶电泳分离,染色;
(4)结果判断:如出现250bp的条带,说明待测菌株为嘧菌酯抗性菌株,否则,说明待测菌株为嘧菌酯敏感菌株。
5.如权利要求4所述的检测抗嘧菌酯柑橘褐斑病菌的方法,其特征在于,AS-PCR的反应体系为:以20μL计,10×PCR buffer 2.0μL,5mmol/L的上下游引物各2.0μL,各浓度为2.5mmol/L的dNTP mixture 2.0μL,5U/μL的Taq酶0.2μL,200ng/μL的模板DNA 1.0μL,ddH2O10.8μL。
6.如权利要求4所述的检测抗嘧菌酯柑橘褐斑病菌的方法,其特征在于,AS-PCR反应条件为:94℃预变性3min,94℃变性40s,65℃退火40s,72℃延伸1min,进行40个循环,最后72℃延伸10min。
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