[发明专利]AS-PCR法检测抗嘧菌酯柑橘褐斑病菌的引物对和方法在审
| 申请号： | 201510364730.4 | 申请日： | 2015-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN104946767A | 公开（公告）日： | 2015-09-30 |
| 发明（设计）人： | 符雨诗;李红叶 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 沈自军 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | as pcr 检测 抗嘧菌酯 柑橘 褐斑 病菌 引物 方法 | ||
1.引物对，包括上游引物和下游引物，其特征在于，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种包含权利要求1所述引物对的AS-PCR法检测试剂盒。
3.如权利要求1所述的引物对在AS-PCR法检测抗嘧菌酯柑橘褐斑病菌中的应用。
4.一种检测抗嘧菌酯柑橘褐斑病菌的方法，包括以下步骤：
(1)提取待测菌株的DNA；
(2)以提取的DNA为模板，利用权利要求1所述的引物对进行AS-PCR扩增；
(3)AS-PCR扩增产物进行凝胶电泳分离，染色；
(4)结果判断：如出现250bp的条带，说明待测菌株为嘧菌酯抗性菌株，否则，说明待测菌株为嘧菌酯敏感菌株。
5.如权利要求4所述的检测抗嘧菌酯柑橘褐斑病菌的方法，其特征在于，AS-PCR的反应体系为：以20μL计，10×PCR buffer 2.0μL，5mmol/L的上下游引物各2.0μL，各浓度为2.5mmol/L的dNTP mixture 2.0μL，5U/μL的Taq酶0.2μL，200ng/μL的模板DNA 1.0μL，ddH2O10.8μL。
6.如权利要求4所述的检测抗嘧菌酯柑橘褐斑病菌的方法，其特征在于，AS-PCR反应条件为：94℃预变性3min，94℃变性40s，65℃退火40s，72℃延伸1min，进行40个循环，最后72℃延伸10min。
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