[发明专利]一种比伐芦定原料药的纯化工艺

说明书

本发明属于药物合成领域，具体涉及一种比伐芦定原料药的纯化工艺。本发明针对比伐芦定的纯化和冻干工艺包括以2种纯化体系组合完成比伐芦定的纯化，第一次纯化(粗纯)的色谱体系由流动相A:0.025至0.2％七氟丁酸溶液和流动相B组成，色谱柱填料为粒径45μm～75μm的十八烷基硅烷键合硅胶填料，梯度洗脱后纯度可达99.8％，第二次纯化(精纯)的色谱体系由流动相A:0.01～0.05％三氟乙酸溶液和流动相B组成，色谱柱填料为粒径10μm的十八烷基硅烷键合硅胶填料，梯度洗脱，经两次纯化后的溶液浓缩，浓缩溶液的纯度可达99.90％。

技术领域

本发明属于药物合成领域，具体涉及一种比伐芦定原料药的纯化工艺。

背景技术

比伐芦定(Bivalirudin)是一种直接凝血酶抑制剂(DTI)，源于水蛭素衍生物，是一个由20个氨基酸组成的合成短肽。比伐芦定是一种有效的、高选择性的可逆抑制剂，不仅能抑制游离型和结合型的凝血酶，还能抑制由凝血酶介导的血小板激活和聚集。比伐芦定药效快、半衰期短，在机体内不与血浆蛋白和红细胞结合，对肝素诱导的血小板减少症和肝素诱导的血栓形成‐血小板减少综合症(HIT/HITTS)不存在风险，此外，治疗中，不需要结合抗凝血酶等辅助因子，也不用激活血小板，这些特点使比伐芦定成为一个理想的肝素替代品。

比伐芦定(也叫做比伐卢定)是一种由28种氨基酸化学合成的多肽。其结构式如下：

D-Phe-L-Pro-L-Arg-L-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-L-Asn-Gly-L-Asp-L-Phe-L-Glu-L-Glu-L-Ile-L-Pro-L-Glu-L-Glu-L-Tyr-L-Leu

2000年12月，美国Medicines公司开发的该药品的注射用剂型在美国上市，商品名为Angiomax，通用名为Bivalirudin，中文名为比伐芦定，上市剂型为冻干粉针剂，规格为250mg/支。

2005年1～2月，Medicines公司在欧洲的子公司Nycomed的Angiox(Bivalirudin在欧洲的商品名)在奥地利、丹麦。芬兰、德国、瑞士和英国上市，用于行经皮冠脉干预病人。其上市的规格为250mg/瓶的无菌冻干粉。Angiomax用于静脉内注射和滴注。

制备比伐芦定的方法已有文献报道，可以采用多肽固相合成以及液相合成法制备比伐芦定粗肽(按照国家药品标准YBH02852011中有关物质检测方法，杂质含量超过标准中规定的比伐芦定粗品，可以定义为比伐芦定粗肽)，但针对比伐芦定粗肽的纯化，仅有为数不多文献报道。

中国专利CN200910028793.7仅仅描述采用HPLC方法纯化比伐芦定初肽及冷冻干燥，未见详细的纯化工艺和冻干工艺的描述，且产品纯度仅能达到98.5％，按照国家药品标准YBH02852011中有关物质不得超过1.5％的规定，制备的比伐芦定原料药已经接近杂质限度，在有效期2年内，长期储存很容易造成有关物质检查项不合格。

中国专利CN200980152943.3揭示了一种纯化比伐芦定初肽的方法采用制备级HPLC在C18反相固定相上纯化所述粗制的肽。第一步，采用醋酸铵/水/乙腈梯度洗脱纯化所述粗制 的肽，然后在第二步，采用三氟乙酸/水/乙腈梯度洗脱。但文中未说明具体的纯化的条件，无法重现其实验结果。