[发明专利]微量起始DNA的高通量测序文库构建方法及其所构建的高通量测序文库

权利要求书

1.一种微量起始DNA的高通量测序文库构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：

步骤S1，对样本DNA进行物理打断，得到片段化DNA；

步骤S2，对所述片段化DNA进行末端修复及加A，得到修复DNA；

步骤S3，利用连接增强剂对所述修复DNA进行接头连接，得到带接头片段；以及

步骤S4，对所述带接头片段进行扩增，得到所述高通量测序文库；

其中，所述连接增强剂为DMSO、乙醇、乙二醇或甘油。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在所述步骤S2中，利用高通量测序文库构建试剂盒中的修复酶混合物进行修复，所述高通量测序文库构建试剂盒中的修复酶混合物包括dNTPs、T4DNA聚合酶、T4PNK以及Klenow酶或Taq酶，并在所述修复过程中向所述修复酶混合物中添加dATP。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述高通量测序文库构建试剂盒包括NEB公司的DNA文库构建试剂盒、Bioo公司的DNA文库构建试剂盒或诺唯赞公司的DNA文库构建试剂盒。

4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，在所述修复过程中向所述修复酶混合物中添加小于等于0.4μl 100mM的dATP。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在所述步骤S3之后以及所述步骤S4之前，所述构建方法还包括对所述带接头片段进行磁珠纯化的步骤。

6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤S4包括：对所述连接片段进行分步扩增，并在每次扩增之后增加磁珠纯化的步骤，得到所述高通量测序文库。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述步骤S4包括：

对所述带接头片段扩增4～7个循环，得到第一扩增片段；

对所述第一扩增片段进行0.95～1.20倍体积的磁珠纯化，得到第一扩增纯化片段；

对所述第一扩增纯化片段扩增6～9个循环，得到第二扩增片段；

对所述第二扩增片段进行0.95～1.20倍体积的磁珠纯化，得到第二扩增纯化片段；以及

利用0.7～0.85倍体积的磁珠对所述第二扩增纯化片段进行分选，得到所述高通量测序文库。

8.一种高通量测序文库，其特征在于，所述高通量测序文库采用权利要求1至7中任一项所述的构建方法构建而成。

9.根据权利要求8所述的高通量测序文库，其特征在于，所述高通量测序文库的库容为50～500ng。