[发明专利]定性定量检测大豆脂肪酸组分的气相色谱方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物化学领域，具体涉及一种定性定量检测大豆脂肪酸组分的气相色谱方法。

背景技术

大豆是世界植物油的主要来源之一。脂肪酸是大豆油脂的主要成分，其含量约占脂肪总量的90％。脂肪酸按性质可分为饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸，其中饱和脂肪酸包括棕榈酸和硬脂酸，不饱和脂肪酸包括油酸、亚油酸和亚麻酸。大豆油脂中的不饱和脂肪酸有降低患心血管疾病的作用，可降低人体中的有害胆固醇，但多不饱和脂肪酸，尤其是亚麻酸，容易被脂肪氧化酶氧化，从而产生豆腥味。改良大豆脂肪酸组分，提高其抗氧化性是近年来大豆脂肪酸育种的主要目标。

由于研究目的不同，不同研究者所采用的脂肪酸甲酯化提取方法存在差异，所使用的提取和甲酯化试剂也各不相同。大多数研究者采用索氏提取法和超临界CO₂萃取法，从不同样品中提取脂肪酸，但耗时较长，步骤繁琐。大豆脂肪酸组分的检测方法主要包括近红外反射光谱分析法(NIRS)、高效液相色谱(HPLC)法和气相色谱法(GC)，而应用最为广泛的当属气相色谱法。目前，针对大豆脂肪酸的检测主要以相对百分比含量测定为主，此类方法较为简单，没有以脂肪酸标准样品作为参照，无法准确反映籽粒中脂肪酸组分的真实含量，因为相对定量的结果只是以总脂肪酸含量的百分比形式呈现的，不能表示各组分的实际含量，例如每克豆粉中究竟含有多少微克的某种脂肪酸。此外，由于不同品种总脂肪酸含量的差异，如果比较两个大豆品种的某个脂肪酸组分含量水平，只用相对百分比就不准确。因此，需要研究一种对大豆脂肪酸组分绝对定量的方法，从而准确检测大豆品种中脂肪酸的种类和含量。

发明内容

为满足上述领域的需求，本发明提供一种定性定量检测大豆脂肪酸组分的气相色谱方法，该方法能准确同时检测大豆脂肪中各种脂肪酸的含量，准确性高，安全性好，操作简便快捷，容易掌握和推广。

本发明请求保护的技术方案如下：

一种大豆总脂肪酸的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将大豆粉装入离心管中，加入正己烷，60℃加热浸提，间隔充分摇匀；

(2)加入甲醇钠溶液进行甲酯化，充分摇匀；

(3)加入饱和氯化钠，静置，取上清液。

进一步地，所述大豆粉、正己烷、甲醇钠溶液和饱和氯化钠溶液的用量比例如下：30.0mg大豆粉：1.0mL正己烷：1.0mL甲醇钠：300μL饱和氯化钠，

其中甲醇钠溶液的浓度为0.5mol/L，所述60℃加热浸提的时长为20分钟。

一种定性定量检测大豆脂肪酸组分的气相色谱方法，包括如下步骤：

(1)获取五种脂肪酸标准曲线及标准曲线方程:

所述五种脂肪酸标准曲线的横坐标分别为棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯和亚麻酸甲酯标准样品的梯度浓度，

所述五种脂肪酸标准曲线的纵坐标为采用气相色谱法检测梯度浓度的各种标准品所得的对应的色谱峰面积值；

(2)采用上述任一提取方法提取待测样品的总脂肪酸；

(3)对待测样品的总脂肪酸进行气相色谱检测，根据各种标准样品的色谱峰保留时间判断待测样品所形成的色谱峰包括哪些脂肪酸的色谱峰，并根据标准曲线定性定量分析待测样品中棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸的含量。

进一步地，所述五种脂肪酸标准曲线中，所述棕榈酸甲酯和硬脂酸甲酯的浓度梯度范围为0.2-20mg/mL，所述油酸甲酯、亚油酸甲酯和亚麻酸甲酯的浓度梯度范围为0.2-40mg/mL。

所述获取五种脂肪酸标准曲线及曲线方程指采用已经制作好的标准曲线数据，或者进行现场实验和制作。

所述气相色谱检测的条件为：色谱柱：RTX-Wax30m×0.25mm×0.25μm；自动进样，进样量：lμL；采用分流进样，分流比：40：1；进样口温度：250℃；载气：氮气，54mL·min^-1；氢气，40mL·min^-1；空气，400mL·min^-1；采取程序升温的方式：180℃保持1.5min，以10℃·min^-1升到210℃，保持2min，然后以5℃·min^-1升到220℃保持5min；检测器：火焰离子检测器，温度为300℃；每个样品检测20min，样品检测之间间隔2min。