[发明专利]一种利用黄腐酸促进雨生红球藻生产虾青素的方法

权利要求书

1.一种利用黄腐酸促进雨生红球藻生产虾青素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、藻液的制备：培养雨生红球藻到对数生长期后期，用缺氮的BG-11培养基稀释藻液并获得诱导的藻液；

步骤2、诱导雨生红球藻积累虾青素：用纯水配成10g L^-1的黄腐酸母液，将黄腐酸母液添加到已经稀释好的诱导的藻液中使黄腐酸浓度达到4.95-5.05mg L^-1；然后将上述藻液进行培养，待藻体细胞完全变红后，收集藻细胞；

步骤3、利用有机溶剂提取藻细胞的虾青素。

2.根据权利要求1所述的利用黄腐酸促进雨生红球藻生产虾青素的方法，其特征在于，所述雨生红球藻为雨生红球藻菌株Haematococcus pluvialis LUGU。

3.根据权利要求1所述的利用黄腐酸促进雨生红球藻生产虾青素的方法，其特征在于，所述步骤1中藻液的制备具体为：在24-26℃、光强2900-3000lx，持续光照条件下培养，培养雨生红球藻到达对数生长期后期，此时细胞浓度达到10⁶cells mL^-1，利用缺氮的BG-11培养基稀释到2×10⁵cells mL^-1作为诱导藻液。

4.根据权利要求1所述的利用黄腐酸促进雨生红球藻生产虾青素的方法，其特征在于，所述步骤2中诱导雨生红球藻积累虾青素中的培养条件为：26-28℃、光强9500-10000lx、冷光灯连续光照及饥饿营养盐的复合胁迫。

5.根据权利要求1所述的利用黄腐酸促进雨生红球藻生产虾青素的方法，其特征在于，所述步骤3中利用有机溶剂提取藻细胞的虾青素具体为：取5ml上述藻液，4000r/min离心5min，弃上清得藻细胞沉淀；分别向藻细胞沉淀中加入2mL 30％甲醇和5％ KOH混合液，60℃水浴15min，4000r/min离心10min，除上清，沉淀加入纯水洗涤2次，除碱液残留；然后加入5mL DMSO，200w超声破壁15min，其中，超声1min，10s间歇，于45℃水浴20min，抽提至藻体发白，离心收集上清测OD490；并按照公式计算得出虾青素的含量，其中C为虾青素含量，A为490nm下OD值，Va为DMSO体积，Vb为藻液体积。