[发明专利]玉屏风制剂指纹图谱的构建方法和检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及药材检测领域，特别是涉及玉屏风制剂指纹图谱的构建方法和检测方法。

背景技术

经典方剂玉屏风制剂是扶正祛邪的代表方，来源自南宋嘉定六年(1213年)张松《究原方》，由黄芪、白术和防风组成。其中黄芪甘温，内补脾肺之气，外可固表止汗，为君药；白术健脾益气，助黄芪以加强益气固表之功，为臣药；佐以防风走表而散风邪。该方对人体犹如抵御外邪的屏障，故称玉屏风。具有益气固表、健脾止汗的作用。主治气虚自汗、易感风寒之证，临床疗效确切，被称为中成药中的丙种球蛋白。

玉屏风制剂为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，但现行的显微鉴别、理化鉴别和含量测定等方法都不足以解决这一问题，建立玉屏风制剂的指纹图谱将能较为全面地反映其中所含化学成分的种类与数量，进而对其质量进行整体描述和评价。这也正好符合中医药整体学说。玉屏风制剂指纹图谱的研究和建立，对于提高玉屏风散质量，促进中药现代化具有重要意义。

然而，就目前而言，玉屏风制剂的质量控制方法还存在一定缺陷，《中国药典》仅通过经氨转化所得黄芪甲苷的含量来表征其质量，而现有关于玉屏风的指纹图谱研究多数集中在汤剂，其它剂型的质量较少得到关注，且获得的指纹图谱的共有特征峰较少，难以全面有效的表征或控制玉屏风制剂的质量。

发明内容

基于此，有必要提供一种玉屏风制剂指纹图谱的构建方法。

一种玉屏风制剂指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：

取玉屏风制剂，粉碎或不粉碎后精密称定，加入甲醇回流提取1-3h(优选为2h)，过滤，即得供试品溶液；

精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，得到由22个共有特征峰构成的玉屏风制剂指纹图谱，其中，

所述高效液相色谱仪采用的流动相为：以乙腈为流动相A，体积浓度0.02-0.1％磷酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式。

在其中一个实施例中，所述梯度洗脱方式为：0-60min，流动相A的体积百分数由15％变化至35％；60-80min，流动相A的体积百分数由35％变化至47％；80-95min，流动相A的体积百分数由47％变化至70％；95-110min，流动相A的体积百分数由70％变化至90％。

在其中一个实施例中，所述流动相B为体积浓度0.05％磷酸水溶液。

在其中一个实施例中，所述高效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱柱(优选为YMCHydrosphereC₁₈，4.6×250mm，5μm)；所述流动相的流速为1.0mL/min；柱温30℃；检测波长230nm。

本发明还提供一种玉屏风制剂指纹图谱的检测方法，包括如下步骤：

取玉屏风制剂，粉碎或不粉碎后精密称定，加入甲醇回流提取1-3h，过滤，即得供试品溶液；

精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，即得，其中，

所述高效液相色谱仪采用的流动相为：以乙腈为流动相A，体积浓度0.02-0.1％磷酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式。

在其中一个实施例中，所述梯度洗脱方式为：0-60min，流动相A的体积百分数由15％变化至35％；60-80min，流动相A的体积百分数由35％变化至47％；80-95min，流动相A的体积百分数由47％变化至70％；95-110min，流动相A的体积百分数由70％变化至90％。

在其中一个实施例中，所述流动相B为体积浓度0.05％磷酸水溶液。

在其中一个实施例中，所述高效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱柱(优选为YMCHydrosphereC₁₈，4.6×250mm，5μm)；所述流动相的流速为1.0mL/min；柱温30℃；检测波长230nm。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明所述玉屏风制剂指纹图谱的构建方法，通过大量的实验对供试品溶液的制备以及高效液相色谱的条件进行了优化研究：

采用甲醇对玉屏风制剂进行回流提取，并合理控制提取时间为1-3h，可有效增加玉屏风制剂中如毛蕊异黄酮葡萄糖苷等成分的稳定性，提高构建所得指纹图谱的准确性和精密度；