[发明专利]利用噬菌体抗体库针对人组胺受体4（HR4）表位模拟肽筛选及其疫苗构建方法

权利要求书

1.一种HR4表位模拟肽，其特征在于，利用噬菌体随机十二肽库筛选得到多肽片段，其氨基酸序列为：FNKWMDCLSVTH。

2.根据权利要求1所述的HR4表位模拟肽疫苗的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、HRH4的模拟表位PT1的人工合成，按照上述的多肽表位氨基酸序列结果，采用固相合成法合成多肽表位PT1(FNKWMDCLSVTH)合成由辉源生物科技(上海)有限公司，纯度为98％以上，同时合成对照多肽；

S2、PT1与HRH4单抗特异性结合实验，以2mg/L PT1和对照多肽包被96孔酶联板，每孔100μl，4℃孵育过夜，倾去包被液，于每孔中加入封闭液，4℃封闭2h，倾去封闭液，TBST洗6次，每次均要将96孔板倒扣在洁净的纸巾上，轻扣除尽残余液体，将人HRH4单克隆抗体，人CEA单克隆抗体分别加入对应的孔中，室温反应1h，TBST洗6次，各孔分别加入HRP标记羊抗兔IgG或HRP标记羊抗鼠IgG，室温孵育1h。TBST洗3次，1min/次，用TMB显色，HCl终止反应，酶标仪450nm处读数；

S3、构建PT1-CTB-脂质体复合物，以0.9％无菌氯化钠溶液溶解多肽和CTB，然后加入相同体积的脂质体Lipofect，使每200μl含多肽100μg，含CTB 5μg，4℃静置过夜，次日晨取出，升至室温(25℃)，即可。

3.根据权利要求2所述的HR4表位模拟肽疫苗的构建方法，其特征在于，所述HR4表位模拟肽疫苗用于治疗变应性的过敏性疾病。