[发明专利]一种共担载阿霉素和TRAIL的白蛋白纳米粒靶向制剂及制备方法

权利要求书

1.一种共担载阿霉素和人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的白蛋白纳米粒靶向制剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下制备步骤：

（1）制备载阿霉素的白蛋白纳米粒

采用去溶剂交联法制备阿霉素白蛋白纳米粒，取牛血清白蛋白适量配制水溶液，用1摩尔每升的氢氧化钠溶液调节pH至8.0；

取牛血清白蛋白溶液1毫升，搅拌下向其滴加盐酸阿霉素乙醇溶液4毫升，加入速度10毫升/分；

然后，在搅拌下向上述溶液滴加4%的戊二醛乙醇溶液，继续搅拌2小时后，转移到旋转蒸发器内，在40℃真空条件下旋转蒸发20分钟以除去乙醇；得到的产物经10 ℃、14000 转/分钟条件下离心10分钟，除去离心上清液，再用蒸馏水重复洗涤离心两次，弃去上清液得到纳米粒；然后向纳米粒中添加适量蒸馏水，涡旋分散，得到载阿霉素的白蛋白纳米粒；

（2）羧甲基壳聚糖-叶酸偶联物 CMCS-FA 的合成：

取0.2克叶酸FA溶于10毫升二甲基亚砜中，向其中加入0.1克的N-羟基琥珀酰亚胺 NHS和0.2 g的N,N'-二环己基碳二亚胺 DCC，其中 FA/NHS/DCC摩尔比为1:2:2 ，室温活化反应12小时，直到叶酸全部溶解；向上述溶液中加入1%的羧甲基壳聚糖 CMCS 的磷酸盐缓冲液和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐EDC，其中CMCS/FA/EDC摩尔比为1:1:1，继续室温避光搅拌16小时；然后向溶液中滴加氢氧化钠调节pH至9.0，用pH 7.4的磷酸盐缓冲液透析24小时，然后用水透析24小时后，冻干处理；

（3）制备共包载阿霉素和人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的叶酸靶向白蛋白纳米粒：

利用层层自组装技术制备共担载阿霉素和人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的纳米粒；取载阿霉素的白蛋白纳米粒溶液1毫升，向其中加入0.25% 聚乙烯亚胺水溶液0.1毫升使纳米粒表面电荷由负变正，搅拌混匀后加入10微克/毫升的人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体溶液，搅拌均匀后再加入1.5毫克/毫升的CMCS-FA溶液，pH8.0 磷酸盐缓冲液配制，使纳米粒电荷由正变负，室温搅拌30分钟，即得。

2.按权利要求1所述的一种共担载阿霉素和人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的白蛋白纳米粒靶向制剂的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述牛血清白蛋白溶液浓度为为1.0-2.0%克/毫升。

3.按权利要求1所述的一种共担载阿霉素和人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的白蛋白纳米粒靶向制剂的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述阿霉素浓度为0.01-0.05%克/毫升。

4.按权利要求1所述的一种共担载阿霉素和人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的白蛋白纳米粒靶向制剂的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述牛血清白蛋白溶液pH值为7.0-9.0。

5.按权利要求1所述的一种共担载阿霉素和人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的白蛋白纳米粒靶向制剂的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述加入聚乙烯亚胺和CMCS的质量比为1:4。