[发明专利]水稻鞘脂的检测方法

权利要求书

1.一种水稻鞘脂的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）加入1ml流动相B至氮气吹干的水稻鞘脂提取物样品，振荡1分钟，超声1分钟；

（2）用0.22微米的尼龙膜过滤样品溶液；

（3）取200 μl的样品溶液至色谱进样瓶；

（4）用高效液相与质谱联用技术对水稻鞘脂进行分析；

其中，液相条件为：流动相A为水、甲酸和甲酸铵的混合物，甲酸的体积百分浓度为0.2%，甲酸铵的浓度为2mM，其余为水；流动相B为甲醇、甲酸和甲酸铵的混合物，甲酸的体积百分浓度为0.2%，甲酸铵的浓度为2mM，其余为甲醇；流速为300 µL/min，柱温为40 ℃；进样量为10 µL；

其中，液相梯度洗脱条件为：0~3分钟，80%流动相B；3~13分钟，80%~90%流动相B；13~25分钟，90%~99%流动相B；25~25.10分钟，99%~80%流动相B；25.10~32分钟，80%流动相B；

使用的色谱柱为Phenomenex Luna C8，2.1×150 mm 3 μm column。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于，质谱的参数设置为：雾化气：60 psi；辅助气：50 psi；气帘气：30 psi；离子源温度：450℃；电压：5000 V。

3.根据权利要求1的方法，其特征在于，使用的质谱系统为AB SCIEX TripleTOF® 5600+质谱系统。

4.根据权利要求1的方法，其特征在于，所述水稻鞘脂通过以下步骤提取获得：

（1）称取0.5克水稻叶片，液氮研磨至粉末，加入4ml提取液和100 μl内标溶液，振荡混匀；所述提取液为体积比为2：1的甲醇和氯仿的混合物；所述内标溶液含C17鞘氨醇、C12 神经酰胺、C12 葡萄糖神经酰胺，浓度均为1 μM；

（2）超声振荡5分钟，随后45℃ 水浴放置10分钟，离心后取上清；

（3）往沉淀中加入3ml提取液，重复步骤2，不加内标；

（4）合并两次的上清，取1ml上清，氮气吹干，温度为35-40℃；

（5）加入1ml由甲胺乙醇溶液和水组成的混合物，其中甲胺乙醇溶液与水的体积比为70:30，进行振荡并超声1分钟，然后置于50℃水浴1个小时；

（6）用氮气吹干溶液。

5.根据权利要求4的方法，其特征在于，在提取水稻鞘脂时，所述步骤（6）中用氮气吹干溶液的温度为35-40℃。

6.根据权利要求4的方法，其特征在于，所述甲胺乙醇溶液由重量比为33:67的甲胺和乙醇组成。