[发明专利]一种果蔗芽变的分子鉴定方法及其专用引物

权利要求书

1.一种果蔗芽变的分子鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：提取果蔗亲本拔地拉及对应的疑似芽变果蔗品种的基因组DNA，采用专用引物分别对基因组DNA进行PCR扩增，对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳以区分芽变，果蔗亲本拔地拉与其对应的疑似芽变果蔗品种之间的电泳条带模式在625bp处有强度差异，疑似芽变果蔗品种为真实芽变品种；所述专用引物为URP38F引物；所述专用引物为序列表SEQ ID NO:1核苷酸序列的引物。

2.根据权利要求1所述的一种果蔗芽变的分子鉴定方法，其特征在于：所述PCR扩增的程序是：94℃预变性4min；94℃变性30s，50℃退火1min，72℃延伸1.5min，其中，变性、退火、延伸三个步骤循环35次；72℃最后一步延伸10min，10℃保存。

3.根据权利要求2所述的一种果蔗芽变的分子鉴定方法，其特征在于：所述PCR扩增体系为20ul，包括：10×PCR含Mg²⁺的Buffer 2.0ul，2.5mM的dNTP 0.5ul，10pmol/ul的URP38F引物1.0ul，2.5U/ul的Taq酶0.5ul，50ng/ul的DNA模板1.0ul，ddH₂O补足。

4.根据权利要求1~3任意一项所述的一种果蔗芽变的分子鉴定方法，其特征在于：所述果蔗的基因组DNA从果蔗植株的嫩叶中提取。

5.根据权利要求4所述的一种果蔗芽变的分子鉴定方法，其特征在于：所述提取果蔗基因组DNA的方法，包括以下步骤：

步骤A：取新鲜果蔗嫩叶，放入研钵中并在研钵中加入PVP，加入液氮，将叶片充分研磨成粉末状样品；

步骤B：将所述粉末状样品转移到装有预热的CTAB提取液的离心管中，并加入ß-巯基乙醇，于65℃水浴锅中温浴60min，混匀；

步骤C：将步骤B的离心管置于冷冻离心机中，12000rpm离心10min后，吸取上清液，并在上清液中加入RNaseA，混匀，静置5min；

步骤D：加入与步骤C所述的上清液等体积的氯仿，抽提，混匀，静置5min，冷冻离心机中12000rpm离心10min；

步骤E：再次吸取上清液，并再次加入与上清液等体积的氯仿抽提，于冷冻离心机中12000rpm离心10min；

步骤F：吸取上清液，并加入与上清液等体积的-40℃的无水乙醇，于-40℃冰箱中沉淀30min，将沉淀物取出放入到新的离心管中，用75%乙醇洗涤；

步骤G：晾至无乙醇味后，用200ul DEPC水或TE缓冲液溶解沉淀物。

6.根据权利要求5所述的一种果蔗芽变的分子鉴定方法，其特征在于：所述步骤F中，采用白色小枪头或牙签将沉淀物取出。