[发明专利]伪狂犬病病毒LA‑A株、构建方法及其应用

权利要求书

1.伪狂犬病病毒株LA-A株，是敲除伪狂犬病病毒AH02LA株gE基因后获得的，所述伪狂犬病病毒AH02LA株的保藏登记号为：CGMCC No.10891。

2.根据权利要求1所述伪狂犬病病毒株LA-A株，其特征在于是敲除伪狂犬病病毒AH02LA株gE基因第1～1418位核苷酸后获得的，所述gE基因的核苷酸序列如SEQ ID No：4所示。

3.权利要求1～2之一所述伪狂犬病病毒株LA-A株的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）分别扩增伪狂犬病病毒AH02LA株gE基因上游同源臂和下游同源臂；将表达绿色荧光蛋白的表达盒插入上游同源臂和下游同源臂之间，得到同源重组片段A；将上游同源臂和下游同源臂直接连接，得到同源重组片段B；

（2）伪狂犬病病毒AH02LA株的DNA与同源重组片段A进行同源重组，挑选在紫外光下发出绿色荧光的重组病毒，获得重组病毒C；

（3）重组病毒C的DNA与同源重组片段B的DNA进行同源重组，挑选在紫外光下不能发出绿色荧光的重组病毒，得到所述伪狂犬病病毒株LA-A株。

4.以权利要求之1～2之一所述伪狂犬病病毒LA-A株为活性成分的疫苗。

5.根据权利要求4所述疫苗，其特征在于所述伪狂犬病病毒LA-A株采用如下方法进行培养：将伪狂犬病病毒LA-A株接种BHK-21细胞，采用含有胎牛血清的DMEM培养基培养36～48小时，收获病毒培养物，冻融后离心取上清液作为伪狂犬病病毒LA-A株病毒液。

6.根据权利要求5所述疫苗，其特征在于所述疫苗为灭活疫苗或活疫苗。

7.根据权利要求6所述疫苗，其特征在于所述灭活疫苗为油乳剂或双相复乳，伪狂犬病病毒株LA-A株采用甲醛或β-丙内酯灭活。