[发明专利]一种UPLC测定黄芪提取物中黄酮类成分的方法

说明书

本发明涉及一种UPLC同时测定黄芪提取物中四种黄酮类成分的方法，所述方法包括以下步骤：步骤1，对照品溶液的制备：分别取毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素和芒柄花苷对照品，加50～80％的甲醇配制成每毫升含毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素和芒柄花苷分别为0.01mg、0.04mg、0.004mg和0.15mg的溶液；步骤2，供试品溶液的制备：取黄芪提取物0.5克，用50～80％的甲醇提取，提取液定容至25毫升，摇匀，即得；步骤3，测定法：分别吸取各对照品溶液和供试品溶液各1‑3μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，外标法计算毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素和芒柄花苷的含量。

技术领域

本发明涉及一种超高效液相色谱法测定中药提取物的方法，特别涉及测定黄芪提取物中四种黄酮类成分的方法。

背景技术

黄芪为豆科植物蒙古黄芪和荚膜黄芪的根，其有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。黄芪中主要含有三类主要成分，分别为三萜皂苷、黄酮类化合物和多糖。

黄酮类化合物(flavonoids)是一类存在于自然界的、具有2-苯基色原酮(flavone)结构的化合物。根据三碳键(C3)结构的氧化程度和B环的连接位置等特点，黄酮类化合物可分为下列几类：黄酮和黄酮醇；黄烷酮和黄烷酮醇；异黄酮；异黄烷酮；查耳酮；黄烷和黄烷醇等。黄酮类化合物中有药用价值的化合物很多，例如由银杏叶制成的舒血宁片含有黄酮和双黄酮类，用于冠心病、心绞痛的治疗。

在传统HPLC系统基础上开发的超高效液相色谱(Ultra PerformanceLC，UPLC)系统突破了色谱科学的瓶颈，充分利用了传统HPLC望尘莫及的亚二微米小粒度色谱柱的优势，使色谱分离的解析度达到新的高度；主要优势表现在：高分离度、高分离速度和高灵敏度。

黄芪提取物是芪参益气滴丸的制剂中间体，是由黄芪药材经水提、醇沉、减压浓缩制成的提取物。经过前期针对黄芪提取物的研究，我们发现黄芪提取物中主要含有四种黄酮类成分：毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素和芒柄花苷。

针对黄芪提取物，目前已经建立起了一整套全面的工艺和质量控制体系，但对于黄芪提取物中的黄酮类成分还缺乏检测方法。因此需要建立这样一种方法，进一步提升产品质量控制水平，从而更加准确的把握产品质量。

发明内容

本发明目的在于提供一种测定黄芪提取物中的黄酮类成分的方法，该方法采用超高效液相色谱法，其中供试品采用50～80％的甲醇提取，色谱条件为采用HSS T3色谱柱，流动相A为含0-0.5％甲酸的水，流动相B为含0-0.5％甲酸的乙腈，流速为0.3-0.6mL/min，检测波长205-280nm。

根据本发明的实施方式之一，其中，供试品采用70％甲醇超声提取。

根据本发明的优选方式之一，其中，流动相A相为0.2％甲酸水溶液，B相为乙腈。

根据本发明的实施方式之一，其中，流动相速度为0.4mL/min。

根据本发明的又一实施方式，其中，检测波长为254nm。

根据本发明，流动相梯度程序可以为：

根据本发明所提供的方法，对照品采取毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素和芒柄花苷，加甲醇配制成每毫升含毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素和芒柄花苷分别为0.01mg、0.04mg、0.004mg和0.15mg的溶液。

根据本发明的实施方式之一，采用超高效液相色谱检测黄芪提取物中黄酮类成分的方法，包括以下步骤：