[发明专利]一种用于检测梨黑斑病菌的引物及利用其检测梨黑斑病菌的检测方法有效
| 申请号： | 201510396232.8 | 申请日： | 2015-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN105039535B | 公开（公告）日： | 2019-02-15 |
| 发明（设计）人： | 陈雨;杨雪;姚剑;李云飞;张爱芳;谷春燕 | 申请（专利权）人： | 安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 230031 安徽省合肥*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 黑斑 病菌 引物 利用 方法 | ||
1.一种用于检测梨黑斑病菌的引物，包括一对引物， 其特征在于：其上游引物序列如HB1所述，下游引物序列如HB2所述,其中，HB1为：TCACCCTTGTCTTTTGCGTA，HB2为：ACCTTTGCTGATAGAGAGTG。
2.一种利用权利要求1所述的引物检测梨黑斑病菌的方法，其特征在于：提取待测样品的DNA作为模板，利用上述设计的的引物进行PCR反应，取PCR反应扩增产物进行检测，如果存在分子量为400bp的DNA条带，则证明所检测样品中含有梨黑斑病菌。
3.根据权利要求2所述的检测梨黑斑病菌的方法，其特征在于：所述PCR反应的扩增体系为：10×Taq buffer 2.5µL、25mmol/L MgCl2 2.0µL、2.5mmol/L dNTP 2.0µL、10µmol/L正反向引物各1. 0µL、5U/L Tagase 0.2µL、20 ng/µLDNA模板2µL,补水至总体积25µL。
4.根据权利要求2所述的检测梨黑斑病菌的方法，其特征在于：所述PCR反应的反应程序为：94℃、4min； 94℃、30 s, 55.8℃、30 s, 72℃、30 s, 35个循环；72℃、10min，4℃保存。
5.一种利用权利要求1所述的引物检测梨黑斑病菌的方法，其特征在于，具体操作如下：提取待测样品的DNA作为模板，利用两对引物进行套式PCR反应，第一轮PCR反应的模板为提取待测样品的DNA，引物为真菌ITS序列通用引物ITS1和ITS4，第二轮PCR反应的模板为第一轮PCR反应产物，引物为所述的引物HB1和HB2，取第二轮PCR反应扩增产物进行凝胶电泳检测，如果存在分子量约为400bp的DNA条带，则证明所检样品中含有梨黑斑病菌。
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