[发明专利]一种MC3T3-E1成骨细胞氧化应激测试方法在审
| 申请号： | 201510396863.X | 申请日： | 2015-07-08 |
| 公开（公告）号： | CN105018562A | 公开（公告）日： | 2015-11-04 |
| 发明（设计）人： | 宁光;赵红燕;刘建民;孙立昊;焦培林;陶蓓 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院附属瑞金医院 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 曹莉 |
| 地址： | 200025 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 mc3t3 e1 细胞 氧化 应激 测试 方法 | ||
1.一种MC3T3-E1成骨细胞氧化应激测试方法，其步骤包括，
（1）将α-MEM培养液37-40℃预热20-25分钟；然后将α-MEM培养液重悬MC3T3-E1细胞，均匀，接种于培养皿中，摇匀，放入37℃、5%CO2培养箱中进行培养；
（2）每2-3天换一次液，3-5天后细胞达到80-90%汇合时弃去原培养液，胎牛血清洗净后，加入1ml浓度为0.25%Trypsin-EDTA放入37℃、5%CO2培养箱中1-2分钟，加入2ml培液终止消化，制成MC3T3-E1细胞悬液；
（3）取生长状态良好的MC3T3-E1细胞悬液接种于六孔板中，α-MEM培养液预培养24小时使细胞贴壁；
（4）取步骤（3）中的浓度为0.1-1.0mmol/L的成骨细胞液，培养20-28小时后加入浓度为0.1-1.0mmol/L的过氧化氢溶液；
（5）去除原有α-MEM培养液，用正常α-MEM培养液清洗2-4次后再用PBS清洗1-3次，每孔加入10ul的CCK-8毒性/增殖检测试剂，37℃避光孵育3小时；
（6）在450nm波长处，测定各孔光吸收值即可。
2.根据权利要求1所述的MC3T3-E1成骨细胞氧化应激测试方法，其特征在于：所述α-MEM培养液中含有质量浓度为10%的胎牛血清和质量浓度为1%的抗生素。
3.根据权利要求2所述的MC3T3-E1成骨细胞氧化应激测试方法，其特征在于：所述抗生素为青链霉素。
4.根据权利要求1所述的MC3T3-E1成骨细胞氧化应激测试方法，其特征在于：所述步骤（1）中的培养皿的厚度为10cm。
5.根据权利要求1所述的MC3T3-E1成骨细胞氧化应激测试方法，其特征在于：所述步骤（1）均匀的方式为十字结合八字法。
6.根据权利要求1所述的MC3T3-E1成骨细胞氧化应激测试方法，其特征在于：所述步骤（3）中的MC3T3-E1细胞悬液接种密度为6x104/cm2。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海交通大学医学院附属瑞金医院，未经上海交通大学医学院附属瑞金医院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201510396863.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：沙眼衣原体荧光PCR快速检测试剂盒
- 下一篇：沼气发酵系统的预处理工艺
