[发明专利]一种RAPD标记竹节参及其近缘植物的品种鉴别的方法

权利要求书

1.一种RAPD标记竹节参及其近缘植物的品种鉴别的方法，可同时鉴别人参，西洋参，三七，珠子参，羽叶三七，竹节参，狭叶竹节参，其特征在于，包括如下步骤：

DNA的提取 常规提取竹节参及其近缘植物的叶片DNA，鉴定浓度和纯度；

PCR反应体系 将上述得到的DNA在PCR反应液下进行扩增反应，其DNA的扩增程序为94℃预变性5min；94℃变性45s，36℃退火60s，72℃延伸90s，循环39次；72℃补充延伸7min，确定得到稳定的扩增产物，即为PCR反应产物，同时PCR扩增反应均设不含模板DNA的空白对照；

RAPD引物筛选 收集RAPD引物，应用软件比对后筛选随机引物，再将随机引物经过RAPD的PCR反应，进行电泳，凝胶分析系统检测照相，筛选的RAPD引物包括F02 5’→3’GAGGATCCCT、I13 5’→3’ CTCTCCGCCA、H03 5’→3’ AGACGTCCAC、F01 5’→3’ ACGGATCCTG；

RAPD-PCR检测竹节参及其近缘植物中DNA扩增产物 应用筛选到的引物，通过优化的PCR反应条件，检测竹节参及其近缘植物中DNA的RAPD-PCR产物，并进行带型分析；

数据分析 根据随机引物PCR扩增电泳图谱，将相同的分子量片段处产生特异性条带的有无进行统计分析，利用特异性条带的有无可将竹节参及其近缘植物分组，使用多个随机引物的分组结果的组合，可以将竹节参及其近缘植物一一区分开来；鉴别人参的带型为F02引物扩增的1100bp(+)700bp(-)和I13引物扩增的800bp(+)；

鉴别西洋参的带型为F02引物扩增的1100bp(+)700bp(-)和I13引物扩增的800bp(-)；

鉴别竹节参的带型为F02引物扩增的1100bp(-)700bp(+)，H03引物扩增的300bp(+)以及I13引物扩增的450bp(+)；

鉴别狭叶竹节参的带型为F02引物扩增的1100bp(-)700bp(+)，H03引物扩增的300bp(-)以及F01引物扩增的500bp(+)；

鉴别羽叶三七的带型为F02引物扩增的1100bp(-)700bp(+)，H03引物扩增的300bp(-)以及F01引物扩增的500bp(-)；

鉴别珠子参的带型为F02引物扩增的1100bp(-)700bp(+)，H03引物扩增的300bp(+)以及I13引物扩增的450bp(-)；

鉴别三七的带型为F02引物扩增的1100bp(-)700bp(-)。

2.根据权利要求1所述的RAPD标记竹节参及其近缘植物的品种鉴别的方法，其特征在于，PCR反应液包括25mM的MgCl₂、10× Taq buffer with KCl、1U/μL的Taq酶、10mM的dNTPMixture、10mM引物，按体积比为6:5:3:1:4的混合原料，其他为灭菌双蒸水，所述的引物为10个碱基的RAPD随机引物。

3.根据权利要求1所述的RAPD标记竹节参及其近缘植物的品种鉴别的方法，其特征在于，所述的10× Taq buffer with KCl为pH8.8的100mM Tris-HCl，500mM KCl，0.8%(v/v)Nonidet P40的混合物。