[发明专利]一种工业制备色谱纯化长春瑞滨的方法

说明书

技术领域

本发明涉及长春瑞滨的分离纯化技术，特别是涉及一种一种工业制备色谱纯化长春瑞滨的方法，属化学制药领域。

背景技术

长春瑞滨（英文名：vinorelbine）是上世纪90年代上市的植物类抗肿瘤药物，至今仍是美国国家综合癌症指南推荐的乳腺癌、非小细胞肺癌等常见恶性肿瘤的一线化疗药物，并被广泛用于卵巢癌、淋巴瘤等其他恶性肿瘤。它通过与微管蛋白结合，使细胞在有丝分裂过程中微管形成障碍，结构式如下：

长春瑞滨

国内对长春瑞滨工业级分离纯化方法研究的不多。中国专利CN10781322A公开了一种长春瑞滨粗品的分离纯化方法，粗品经碱性氧化铝柱洗脱后，得到初纯品，再经C₁₈反相填料柱洗脱，洗脱液经二氯甲烷萃取、再用甲醇重结晶得到长春瑞滨纯品；

中国专利CN 102199165A公开了长春瑞滨粗品经硅胶柱层析、碱性氧化铝柱层析后得到高纯度产品的工艺，但该工艺步骤繁多，生产成本高，不适宜工业化生产。

中国专利CN103788117A公开了长春瑞滨作为中间产品的小试纯化工艺，经过硅胶柱层析，产品纯度可达99%以上，但收率仅为27%左右，该工艺经济性低，不适宜工业化生产。

本发明研究了一种工业制备色谱制备高纯度长春瑞滨的方法，产品纯度高（98%以上），且工艺收率稳定，适合工业化大生产。

发明内容

针对长春瑞滨纯化效率低、工艺复杂等难题，本发明的目的是提供一种高纯度、操作性强、适合工业化生产的长春瑞滨的纯化方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种长春瑞滨的纯化方法，包括如下步骤：

（1）采用有机溶剂A溶胀后的硅胶为色谱柱填料制备色谱柱；

（2）用有机溶剂A将长春瑞滨粗品溶解后加入上述色谱柱；

（3）采用梯度淋洗的方法对色谱柱进行洗脱，依次用体积比逐渐减小的有机溶剂A/有机溶剂B混合液作为洗脱液进行洗脱，收集主成份流出液，最后用溶剂洗下残留物；

（4）减压浓缩回收洗脱剂，得到高纯度长春瑞滨，纯度98 wt%以上，收率为60～98%。

在上述制备方法中：

步骤（1）中，所采用硅胶为100～400目；

步骤（1）中，所述有机溶剂A为二氯甲烷、正丁醇、甲基异丙酮、乙酸乙酯、氯仿、二氧六环中的一种；

步骤（2）中，长春瑞滨上样量为1～6 (w/w%)，进料量为制备色谱柱体积的1～12%；

步骤（3）中，所述有机溶剂B为丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、甲醇、二甲亚砜中的一种；

步骤（3）中，采用恒压恒流泵进洗脱剂，洗脱剂依次为溶剂A：B=99：1～75：1(v/v)、溶剂A：B=65：1～45：1(v/v)、溶剂A：B=45：1～15：1(v/v)，洗脱剂用量为柱体积的200～500%，洗脱流速为每分钟洗脱柱体积的1～10%；制备色谱柱运行的压力为0.1～0.7 MPa；

步骤（3）中，洗脱液分段收集，收集分两段，第一段收集溶剂A：B=65：1～45：1(v/v)馏分，为含量较低的长春瑞滨洗脱液；第二段收集溶剂A：B=45：1～15：1(v/v)馏分，主要为高浓度长春瑞滨洗脱液。

步骤（3）中，采用溶剂A：B=15：1～5：1(v/v)洗脱残留物。

本发明以长春瑞滨粗品为起始原料，通过硅胶工业制备色谱纯化分离，实现高纯度长春瑞滨的制备。本发明具有如下优点：

1、产品纯度高，该方法可使长春瑞滨的纯度达到98%以上，收率为60～98%。固定相稳定，可重复使用；

2、本发明使用的洗脱剂易回收，可反复使用，生产成本低；

3、工艺过程简单，设备一次性投入小，能耗低，可操作性强，适合工业化生产。

附图说明

图1是本发明实施例1采用的长春瑞滨粗品原料的液相色谱分析图谱。

图2是本发明实施例1得到的长春瑞滨产品的液相色谱分析图谱。

具体实施方式

实施例1

1)称取5.96 kg 300目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20cm×52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装好的制备色谱柱；

2)将270g 长春瑞滨粗品（纯度为67.00%）用氯仿溶解，进料，进料量为300ml；