[发明专利]直接重编程小鼠肝细胞为胰岛β细胞的方法及应用有效
| 申请号： | 201510400183.0 | 申请日： | 2015-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN105002142B | 公开（公告）日： | 2019-04-05 |
| 发明（设计）人： | 李富荣;齐晖;邓春艳;张田田 | 申请（专利权）人： | 深圳市人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N5/071;C07K14/62;A61K38/28;A61K35/39;A61P3/10 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;白艳 |
| 地址： | 518020 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重编程 胰岛β细胞 蛋白编码基因 转染 小鼠肝细胞 筛选 重编程效率 离体肝脏 胰岛细胞 转录因子 转染试剂 转染效率 成熟度 非病毒 肝细胞 应用 细胞 研究 | ||
1.一种使离体成体细胞重编程为胰岛β细胞的方法，包括如下步骤：将Pdx1蛋白编码基因、Pax4蛋白编码基因和Neurod1蛋白编码基因转染离体肝脏细胞，得到胰岛β细胞；
所述Pdx1蛋白的氨基酸序列为序列6；
所述Pax4蛋白的氨基酸序列为序列7；
所述Neurod1蛋白的氨基酸序列为序列8；
所述Pdx1蛋白编码基因、所述Pax4蛋白编码基因和所述Neurod1蛋白编码基因的转染顺序依次为所述Pdx1蛋白编码基因、所述Pax4蛋白编码基因和所述Neurod1蛋白编码基因；
其转染间隔时间均为24h。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
所述Pdx1蛋白编码基因通过包含Pdx1蛋白编码基因的重组载体转染所述离体肝脏细胞；
所述包含Pdx1蛋白编码基因的重组载体为将所述Pdx1蛋白编码基因插入表达载体，得到的重组载体；
所述Pax4蛋白编码基因通过包含Pax4蛋白编码基因的重组载体转染所述离体肝脏细胞；
所述包含Pax4蛋白编码基因的重组载体为将所述Pax4蛋白编码基因插入表达载体，得到的重组载体；
所述Neurod1蛋白编码基因通过包含Neurod1蛋白编码基因的重组载体转染所述离体肝脏细胞；
所述包含Neurod1蛋白编码基因的重组载体为将所述Neurod1蛋白编码基因插入表达载体，得到的重组载体。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：
所述表达载体均为pCDNA3.1-EGFP。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述离体肝脏细胞为NCTC-1469。
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