[发明专利]抑制STAT3表达和防治慢性移植物抗宿主病的shRNA及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种shRNA，特别涉及一种可抑制STAT3表达和防治慢性移植物抗宿主病的shRNA小分子靶向药物及其应用。

背景技术

慢性移植物抗宿主病(chronic graft versus host disease，cGVHD)是异基因造血干细胞移植(allogeneic hemapoietic stem cells transplant，allo-HSCT)长期存活患者的主要并发症，不仅严重影响患者的生存质量，也是导致非复发死亡的主要原因。随着allo-HSCT的广泛开展，约30％～70％患者可在移植后中位4～6个月发生不同程度的cGVHD，严重限制了allo-HSCT的应用和发展。GVHD主要是由于有免疫活性的供体来源T细胞与受体组织反应的结果。目前研究认为，cGVHD主要是由于供者自身反应性T细胞的活化所引发的免疫排斥，现有免疫抑制治疗多以抑制T细胞活化为主要出发点，尽管这些措施能够在一定程度上减少移植排斥，但是仍存在白血病等复发，甚至由于过度免疫抑制而引发致命性感染、继发第二肿瘤等并发症，而抑制不足则导致cGVHD难以控制。寻找更有效、更精确调控机体免疫抑制效果的新策略是移植领域研究的热点，亦可能是解决移植排斥并发症的根本出路。

近年来，利用RNA干扰技术，将化学合成的短发夹干扰RNA(short hairpin RNA，shRNA)转导至特定的细胞，沉默相关基因的表达，是研究基因功能最有效的手段之一，也是靶向基因治疗最有吸引力的方法之一。选择特异性的靶基因合成有效的shRNA，并且选择合适转染方式，使其在宿主细胞中高效作用，是实施这一靶向治疗措施的重点。有效的靶向治疗是目前国内外不断在寻找的治疗方法。幼稚CD4⁺Th细胞可以被活化并分化成熟为有不同功能的效应性Th细胞。Th17细胞是在自身免疫性疾病发病机制的研究中，新发现一个分泌IL-17，但其分化不依赖于Th1或Th2分化所需的细胞因子和转录因子的CD4⁺T细胞亚群。Th17细胞在自身免疫性疾病和移植排斥领域有较广泛的研究，但有关Th17在GVHD发生发展中的作用，近年才开始引起学者关注。我们的前期研究应用基因表达谱芯片发现STAT3及IL-17A、IL-21在cGVHD病人表达升高，并且发现cGVHD患者外周血中存在Th17↑/Treg↓失衡。新近研究发现：JAK/STAT信号转导途径是Th细胞极化的重要通路，其中信号转导及转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3)STAT3是Th17细胞分化的信号转导通路的核心，是T细胞向Th17或Treg分化的“支点”，调控Th17和Treg之间的动态平衡。

我们在前期研究基础上结合免疫领域最新热点，首次提出通过阻断STAT3，对Th17/Treg平衡进行调控，从而达到抑制cGVHD的研究思路。探讨阻断STAT3信号对诱导Th17、Treg分化及其相互调控的作用及机制，阐明Th17/Treg“漂移”在cGVHD发生发展过程中的作用，为进一步寻求cGVHD的免疫治疗新靶点提供实验依据。靶向针对STAT3基因的shRNA序列对于开发新的抗cGVHD基因药物和提高cGVHD的治疗效果有重要的意义，具有广阔的应用前景和经济价值。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种能高效抑制STAT3表达和防治慢性移植物抗宿主病的shRNA。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种抑制STAT3表达和防治慢性移植物抗宿主病的shRNA，合成序列如下所示：

正义链：

5’-TCGACTTTGATTTCAACTACAACTCGAGTTGTAGTTGAAATCAAAGTCGTTTTTTC-3’反义链：

5’-TCGAGAAAAAACGACTTTGATTTCAACTACAACTCGAGTTGTAGTTGAAATCAAAGTCGA-3’

所述的shRNA应用于抑制STAT3基因(NM_213659)的表达。靶向序列为ACTTTGATTTCAACTACAA。

本发明的另一目的在于提供一种可高效抑制或治疗慢性移植物抗宿主病的药物。

该药物含有如上所述的shRNA作为药物的活性成分。该药物是通过慢病毒载体感染宿主细胞将shRNA药物整合至目的基因组，从而抑制STAT3基因表达和防治慢性移植物抗宿主病。

制备上述可高效抑制或治疗慢性移植物抗宿主病的药物步骤如下：