[发明专利]一种用于确定小麦黑穗菌(Tilletia controversa Kühn)侵染小麦组织的染色方法

权利要求书

1.一种用于确定小麦黑穗菌(Tilletia controversa Kühn) 侵染任一生长时期的小麦组织的染色方法，包括如下步骤：

（1）固定：取不同生长时期的小麦组织样品，在无水乙醇固定液浸泡不少于24h；

（2）染色：将样品先置于含10 µg/ml Propidium Idodide和0.02% Tween20的A染色液中浸泡15min, 然后置于20 µg/ml WGA-AF 488的B染色液中 20 min，最后用 1× PBS pH7.4冲洗；

（3）将处理后样品置于载玻片上加盖玻片倒置后在激光共聚焦显微镜下观察是否有菌丝侵染；

所述小麦组织样品指叶片、茎秆、花药或子房。

2.根据权利要求1所述的染色方法，所述小麦组织样品指叶片，需剪成5mm的方块且去掉四周边缘。

3.权利要求1或2所述的染色方法在确定小麦黑穗菌侵染小麦组织方面的应用。

4.一种用于确定小麦黑穗菌侵染小麦组织的试剂盒，特征在于，包括：A染色液 和B染色液，A染色液是含10 µg/ml Propidium Idodide的0.02% Tween20溶液， B染色液是20 µg/ml WGA-AF 488。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于细胞学实验的常规试剂：1×PBS pH 7.4、无水乙醇、蒸馏水。

6.一种用于确定小麦黑穗菌侵染小麦组织的试剂盒的生产方法，其特征在于，组装试剂盒的试剂中包括A染色液 和B染色液，A染色液是含10 µg/ml Propidium Idodide的0.02% Tween20溶液， B染色液是20 µg/ml WGA-AF 488。

7.根据权利要求6所述的生产方法，其特征在于，组装试剂盒的试剂中还包括1× PBSpH 7.4、无水乙醇、蒸馏水。