[发明专利]一种调控基因在非分泌型腺毛中表达的启动子及其应用

权利要求书

1.一种调控基因在非分泌型腺毛中表达的启动子，其特征在于，所述启动子为萜类合成酶基因启动子，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种如权利要求1所述的调控基因在非分泌型腺毛中表达的启动子在青蒿生产代谢产物的基因工程育种中的应用。

3.一种调控基因在非分泌型腺毛中表达的启动子的用途，其特征在于，所述启动子为特异型启动子，能够代替组成型启动子引导外源基因在青蒿非分泌型腺毛中特异表达,所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.一种载体，其特征在于，所述载体连接有如权利要求1所述的调控基因在非分泌型腺毛中表达的启动子。

5.一种调控基因在非分泌型腺毛中表达的启动子的制备方法，其特征在于，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述制备方法包括以下步骤：

步骤一、培养青蒿无菌苗；

步骤二、克隆调控基因在非分泌型腺毛中表达的启动子基因组序列；

步骤三、分析调控基因在非分泌型腺毛中表达的启动子上面的顺式作用元件，确定所述启动子类型；

步骤四、将克隆到的所述启动子通过酶切连接连入pCAMBIA1391z载体中；

步骤五、将步骤四中构建好的所述载体转化根癌农杆菌；

步骤六、将步骤五中带有载体的根癌农杆菌稳定转化青蒿；

步骤七、PCR检测转基因植株；

步骤八、确定所述启动子所引导的GUS报告基因在植株中表达部位。

6.如权利要求5所述的一种调控基因在非分泌型腺毛中表达的启动子的制备方法，其特征在于，所述步骤二为以基因组DNA为模板，采用两轮巢式PCR方法扩增非分泌型腺毛特异启动子序列。

7.如权利要求5所述的一种调控基因在非分泌型腺毛中表达的启动子的制备方法，其特征在于，所述步骤三中调控基因在非分泌型腺毛中表达的启动子上面的顺式作用元件包括：TATA box、CAAT box、G-box、AE-box、ARE、GA-motif、GARE-motif和GATA-motif。

8.如权利要求5所述的一种调控基因在非分泌型腺毛中表达的启动子的制备方法，其特征在于，所述步骤四中，为构建pCAMBIA1391z载体，正向引物中引入PstI酶切位点，反向引物中引入EcoRI酶切位点，引物序列如下所示：

1391z-proFDS1-F：AACTGCAGTGACGGGCAGATTGACGAT

1391z-proFDS1-R：CGGAATTCGCATGCCATTTACAACAGATT。

9.如权利要求5所述的一种调控基因在非分泌型腺毛中表达的启动子的制备方法，其特征在于，所述步骤六具体包括：

1)外植体的预培养；

2)农杆菌与外植体的共培养；

3)抗性再生植株的筛选。