[发明专利]一种基于Pd/V2O5/MWCNTs的肠癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于Pd/V₂O₅/MWCNTs的肠癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将直径为3~5 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

（2）将6μL、1.0~2.0 mg/mL的二氧化锡掺杂的石墨烯溶液滴涂在电极表面，晾干，用超纯水冲洗，晾干；

（3）滴涂6 μL的金纳米粒子溶液于电极表面，晾干，超纯水冲洗，晾干；

（4）滴涂6 μL、8 ~ 12 μg/mL的肠癌肿瘤标志物捕获抗体Ab₁溶液于电极表面，4^oC冰箱中干燥；

（5）超纯水冲洗掉未结合的捕获抗体Ab₁后，滴加将6 μL、质量分数为0.1~1.0%的牛血清白蛋白BSA溶液于电极表面，4^oC冰箱中晾干；

（6）超纯水冲洗掉未结合的BSA后，滴加6 μL、0.1 pg/mL ~ 50 ng/mL的一系列不同浓度的肠癌肿瘤标志物抗原标准溶液于电极表面，室温孵化1h，超纯水清洗， 置于4^oC冰箱中干燥；

（7）将6 μL、1 ~ 3 mg/mL的检测抗体孵化物Pd/V₂O₅/MWCNTs /Ab₂溶液滴涂于电极表面上，室温孵化1h，超纯水清洗干净，置于4^oC冰箱中晾干，制得一种基于Pd/V₂O₅/ MWCNTs的肠癌肿瘤标志物免疫传感器。

2.如权利要求1所述的一种基于Pd/V₂O₅/MWCNTs的肠癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法，所述的二氧化锡掺杂的石墨烯、金纳米粒子溶液、检测抗体孵化物Pd/V₂O₅/MWCNTs /Ab₂溶液，其特征在于，制备步骤如下：

（1）二氧化锡掺杂的石墨烯的制备

取0.1 g 干燥的氧化石墨烯分散在500 mL 超纯水中，超声90 min分散均匀，制得氧化石墨烯悬浊液；

将2.2 ~ 2.6 g 五水氯化锡溶解于20 mL 超纯水中，加入6 ~ 10 mL 的氧化石墨烯悬浊液混合，搅拌反应5 h后，以8000 r·min^-1的转速下，离心分离，除去上清液，所得的固体在氩气保护下500^oC加热2 h，制得二氧化锡掺杂的石墨烯；

（2）金纳米粒子溶液的制备

将4.0~4.2 mL、1% 氯金酸加入到95.8 mL超纯水中，边搅拌边加入10 mL、 38.8 mmol/L 的柠檬酸钠，在100^oC下回流15 min，离心分离，弃去沉淀，分散均匀的酒红色的上清液即为金纳米粒子溶液；

（3）检测抗体孵化物Pd/V₂O₅/MWCNTs /Ab₂溶液的制备

①Pd 纳米粒子溶液的制备

将100 ~ 110 mg聚乙烯吡咯烷酮PVP、170 ~ 190 mg柠檬酸、34.4 mg氯化钯溶于3 mL乙醇和8 mL超纯水的混合液中，80^oC下磁力搅拌3h，冷却至室温，加入6 ~ 10 mL苯甲醇离心，弃去上清液；用超纯水洗涤三次，倒掉上清液，剩余的黑色液体即为Pd 纳米粒子溶液；

②V₂O₅/MWCNTs的制备

将0.6~0.8 g 多壁碳纳米管分散在40 mL硫酸和硝酸以H₂SO₄:HNO₃=3:1的比例的混合溶液中，40^oC反应2h ；冷却到室温，离心洗涤至溶液成中性，50^oC真空干燥，制得纯化的多壁碳纳米管；

将0.95~1.15 g V₂O₅粉末溶于80 mL、30%的双氧水，当形成红色的澄清溶液30 min 后，加入0.18 g 上述纯化的多壁碳纳米管，搅拌6~ 8 h，陈化24 h，形成胶态悬浊液；将上述悬浊液转移到聚四氟乙烯高压反应釜，恒温180^oC 下反应72 h；离心分离，并用超纯水洗涤，直至上清液无色，35^oC真空干燥8 h，制得黑色粉末V₂O₅/MWCNTs；

③Pd/V₂O₅/MWCNTs 的制备

将20~30 mg的V₂O₅/MWCNTs加入至Pd 纳米粒子溶液中，超声15 min，磁力搅拌3 h，离心，除去上清液，加入20 mL 乙酸，加热至60^oC，反应30 min，离心，除去上清液，无水乙醇洗3次，35^oC真空干燥，制得Pd/V₂O₅/MWCNTs；

④Pd/V₂O₅/MWCNTs /Ab₂溶液的制备

在2 mL、2~ 4 mg/mL的Pd/V₂O₅/MWCNTs溶液中，加入1~3 mL、8~12 μg/mL的肠癌肿瘤标志物检测抗体Ab₂溶液，4^oC恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h；离心分离后，加入1 mL的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液，得到检测抗体孵化物Pd/V₂O₅/MWCNTs/Ab₂溶液，4^oC下保存备用。