[发明专利]一种基于Pd/V2O5/MWCNTs的肠癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于Pd/V₂O₅/MWCNTs的肠癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法及应用。具体是采用Pd/V₂O₅/MWCNTs作为检测抗体标记物，制备一种检测肠癌肿瘤标志物的夹心型电化学免疫传感器，属于新型功能材料、免疫分析以及生物传感检测技术领域。

背景技术

肠癌是是胃肠道中常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率近年来明显上升。肠癌的早期诊断可以大大提高治愈率，提高患者的生存质量，在临床研究上，发展快速、简便、灵敏的检测肠癌肿瘤标志物方法是十分重要的。

目前已有的癌症标志物的临床检测方法很多,如放射免疫分析法、免疫放射分析法、酶标记免疫分析法、化学免疫发光分析法、时间分辨荧光免疫分析法等，但多数检测方法繁琐，操作复杂，费用昂贵，检出限高，因此，建立一种快速、简便、灵敏的检测方法具有重要意义。

免疫传感器是将免疫学方法与分析化学方法相结合的一种生物传感器，通过抗原与抗体之间的特异性结合，使得它具有灵敏度高、选择性好、结构简单、操作简便、易于小型化、可连续、快速自动化检测分析等优点，因此本发明制备了一种应用二氧化锡掺杂的石墨烯、金纳米粒子作为基底材料和以Pd/V₂O₅/MWCNTs 为标记物的肠癌免疫传感器，实现了对肠癌肿瘤标志物的检测。

而构建电化学免疫传感器的关键有两点：其一是采用简单、快速、有效的方法将抗原抗体等生物分子固定在电极表面；其二是开发传感器的信号放大技术。

二氧化锡掺杂的石墨烯具有良好的导电性能，金纳米粒子、Pd及V₂O₅具有良好的催化性能，MWCNTs以其大的比表面积能够很好的固载抗体，能够加速电子传递，对于提高传感器灵敏度具有重要作用。

发明内容

本发明的目的之一是基于Pd/V₂O₅/MWCNTs作为检测抗体标记物，构建了一种快速超灵敏的夹心型电化学免疫传感器。

本发明的目的之二是将该夹心型电化学免疫传感器应用于肠癌肿瘤标志物的检测。

本发明的技术方案如下：

1. 一种基于Pd/V₂O₅/MWCNTs的肠癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将直径为3 ~ 5mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

（2）将6 μL、1.0~2.0 mg/mL的二氧化锡掺杂的石墨烯溶液滴涂在电极表面，晾干，用超纯水冲洗，晾干；

（3）滴涂6 μL的金纳米粒子溶液于电极表面，晾干，超纯水冲洗，晾干；

（4）滴涂6 μL、8 ~ 12 μg/mL的肠癌肿瘤标志物捕获抗体Ab₁溶液于电极表面， 4^oC冰箱中干燥；

（5）超纯水冲洗掉未结合的捕获抗体Ab₁后，滴加将6 μL、质量分数为0.1~1.0%的牛血清白蛋白BSA溶液于电极表面，4^oC冰箱中晾干；

（6）超纯水冲洗掉未结合的BSA后，滴加6 μL、0.1pg/mL~ 50 ng/mL的一系列不同浓度的肠癌肿瘤标志物抗原标准溶液于电极表面，室温孵化1h，超纯水清洗， 置于4^oC冰箱中干燥；

（7）将6 μL、1 ~ 3 mg/mL的检测抗体孵化物Pd/V₂O₅/MWCNTs/Ab₂溶液滴涂于电极表面上，室温孵化1h，超纯水清洗干净，置于4^oC冰箱中晾干，制得一种基于Pd/V₂O₅/ MWCNTs的肠癌肿瘤标志物免疫传感器。

2. 如权利要求1所述的一种基于Pd/V₂O₅/MWCNTs的肠癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法，所述的二氧化锡掺杂的石墨烯、金纳米粒子溶液、检测抗体孵化物Pd/V₂O₅/MWCNTs /Ab₂溶液，其特征在于，制备步骤如下：

（1）二氧化锡掺杂的石墨烯的制备