[发明专利]一种犬细小病毒增殖方法

权利要求书

1.一种犬细小病毒增殖方法，其特征在于该方法以F81细胞作为宿主细胞增殖犬细小病毒，同时以激流式生物反应器作为细胞培养装置。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于该方法是先以激流式生物反应器培养F81细胞，而后再向细胞培养液中接种犬细小病毒，增殖细小病毒。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述培养F81细胞，是在激流式生物反应器中采用微载体悬浮培养的方式培养F81细胞。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)向激流式生物反应器中加入细胞培养液，以(0.1～1)×10⁶个细胞/mL培养液的比例接种F81细胞培养，所述反应器中具有微载体；

2)当细胞密度达到(1～10)×10⁶个细胞/mL培养液时以0.01～0.03MOI的接种量向培养液中接入犬细小病毒，继续培养细胞；

3)取培养液固液分离，收集上清即得到犬细小病毒液。

5.根据权利要4所述的方法，其特征在于步骤1)中细胞培养液的加入量为激流式生物反应器最大装液量的1/2～3/4。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于步骤1)中用于接种的F81细胞，是经EDTA-胰酶细胞分散液消化得到F81细胞悬液。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于步骤2)中当细胞密度达到(1～10)×10⁶个细胞/mL培养液时，继续培养细胞4～6h，而后以0.01～0.03MOI的接种量向培养液中接入犬细小病毒，再继续培养细胞。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于步骤3)中当微载体上细胞全部脱落后，取培养液固液分离，收集上清即得到犬细小病毒液。

9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述细胞培养液包括以下成分：85～90％(w/w)的DMEM液，青霉素钠80～120单位/ml，链霉素80～120单位/ml，余量为牛血清；所述培养基pH为7～7.8。

10.根据权利要求4所述的方法，其特征在于步骤1)中对细胞的培养或步骤2)中接种犬细小病毒后对细胞的培养，满足以下培养条件：培养温度35～39℃，培养液pH7～7.8，培养液溶氧45～55％，搅拌速度50～70rpm。