[发明专利]一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于食品资源的精深加工技术领域，具体涉及一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法。

背景技术

随着人们生活水平不断提高，也提高了对天然有机物质的追求。保护人体健康、防病治病的天然植物性来源的无毒无害的物质，越来越受人们的青睐。然而人工合成花青素，毒副作用较大，世界卫生组织已经禁止使用该物质。因此纯天然制备高纯度小叶女贞果花青素的方法迫在眉睫。

小叶女贞(拉丁学名L.quihoui)又叫小白蜡，是被子植物门，双子叶植物纲，木犀科女贞属的植物，是一种庭院中经常栽植的重要的观赏性的园艺灌木，主要生长在沟边，路旁，山坡和河边灌丛中，在全国各地都有广泛的分布，资源丰富。

小叶女贞的果实，呈椭圆形，黑色，性凉，味苦，果实入药后可以治疗肝炎。其花白色，叶薄革质。根叶也都可以入药，具有清热解毒的功效，可治疗外伤、烫伤等症。它叶小、常绿，且耐修剪，生长迅速，是制作盆景的优良树种。且能够吸收多种有毒气体，是具有优良的抗污染能力的树种。

到目前为止，花青素的纯化方法主要有溶剂萃取法、铅盐沉淀法、柱层析法、膜分离法、高速逆流色谱法等方法。其中溶剂取法简单快速、但选择性不高，得到的花青素纯度比较低；铅盐沉淀法制得的花青素纯度较高，但铅离子的引入导致花青素产品的安全性较差，使其应用受到极大限制；柱层析法应用过程中，常用甲醇或丙酮为洗脱剂，且含有较多的有毒溶剂残留；高速逆流色谱法多用于花青素纯品的制备，其应用过程中多用正丁醇、异丙酮等有毒有机溶剂。

随着科研领域对绿色、纯天然花青素产品制备技术的不断改进，目前国内外对小叶女贞果实花青素纯化研究的相关专利或论文文献，几乎没有。

发明内容

本发明采用了溶剂萃取法及层析法联用技术，在简化操作工艺及节约成本的基础上，制得了高纯度的花青素产品，且产品安全可靠，填补了小叶女贞果纯化花青素的技术空白。通过本发明，能够推动对小叶女贞果实的系统研究，能够深入的探索其潜在的药用价值，实现对小叶女贞果实的最大化的合理运用。

本发明的目的在于提供一种纯天然小叶女贞果花青素的制备方法，本发明所述的纯天然小叶女贞果花青素的制备方法，具体步骤如下：

(1)原料预处理：将新鲜或冷冻的小叶女贞果皮和果肉打浆，制得果浆；

(2)浸提液制备：向果浆中加入质量分数60％～80％的酸化的乙醇溶液，果浆与酸化的乙醇溶液的质量比为1：5～8，进行提取，提取后将浸提液与果渣分离；再向所得的果渣中加入质量分数60％～80％的酸化的乙醇溶液，果渣与酸化的乙醇溶液的质量比为1：5～8，进行提取，提取后将浸提液与果渣分离；合并两次浸提液；每次提取的温度为25～40℃，提取时间的为10～15小时；

(3)粗提液制备：将步骤(2)得到的浸提液在温度45～55℃、真空度在-0.08～-0.1MPa条件下进行减压浓缩，减压浓缩比为5～10，回收乙醇，得小叶女贞果花青素粗提液；

(4)花青素萃取液制备：将步骤(3)得到的小叶女贞果花青素粗提液与乙酸乙脂按体积比1：1～3混合，充分振荡混匀后进行第一次萃取，收集下层水溶液；再将下层水溶液与乙酸乙脂按体积比1：1～3混合，充分振荡混匀后进行第二次萃取，收集下层水溶液；每次萃取时间为2～4小时，萃取温度为25～30℃，萃取次数为2～4次，最后得花青素萃取液；通过萃取除去黄酮类、脂溶性的蛋白、多糖、色素等杂质；

(5)大孔树脂柱纯化：将步骤(4)中制得的小叶女贞果花青素萃取液加入到预处理后的大孔树脂柱内，除去糖类、蛋白类、弱极性的黄酮类，上样量为树脂体积的1/6～1/8；再用含0.001wt％～0.01wt％HCl的去离子水以0.5～1BV/h的流速洗脱柱子，用Molish反应不断检测流出液，直至还原糖全部洗脱出去为止；然后用酸化的质量分数25％～35％乙醇溶液以2～3BV/h的流速洗脱柱子，柱温保持在15～20℃，收集洗脱液，将洗脱液在温度45～55℃、真空度在-0.08～-0.1MPa条件下减压浓缩，减压浓缩比是5～10，回收乙醇，真空冷冻干燥，制得纯度在30％～40％的小叶女贞果花青素。

其中，步骤(2)所述的酸化的乙醇溶液为含有0.01wt％～0.1wt％盐酸或乙酸的乙醇溶液，步骤(5)所述的酸化的乙醇溶液为含有0.001％～0.01％盐酸或乙酸的乙醇溶液。

优选地，步骤(2)中的分离可采用板框过滤器或浆渣分离机；

优选地，步骤(3)中可采用浓缩罐或旋转蒸发仪进行减压。