[发明专利]一种铅-IgE螯合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种铅-IgE螯合物，其特征在于，铅离子与IgE通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。

2.一种如权利要求1所述的铅-IgE螯合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

A)铅与IgE的螯合反应：在提纯源于人体的IgE或按照生物学方法重组的IgE中加入铅离子进行螯合反应，得到反应溶液；

B)纯化铅-IgE螯合物的提取：采用免疫亲和层析法，去除反应溶液中未反应的IgE以及多余的铅离子，即得铅-IgE螯合物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，

所述步骤B)具体如下：

(1)溶解样品：向经过步骤A)得到的反应溶液中加入生理盐水使铅-IgE螯合物复溶；

(2)平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与IgE特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；

(3)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(1)中样品，然后上柱，IgE与填料特异性结合；

(4)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.05-0.1mol/L的磷酸盐溶液进行洗脱，得到洗脱液Ⅰ；

(5)收集：收集洗脱液Ⅰ；

(6)透析：将步骤(5)中的收集的洗脱液，装透析袋，用ddH₂O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本；

(7)平衡层析柱：采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能与铅特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱；

(8)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(6)中样本，然后上柱；

(9)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.5-1.0mol/L的磷酸盐溶液进行洗脱，得到洗脱液Ⅱ；

(10)收集：收集洗脱液Ⅱ；

(11)透析：将步骤(10)中的收集的洗脱液，装透析袋，用ddH₂O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本，即得铅-IgE螯合物。

4.根据权利要求2所述的铅-IgE螯合物的制备方法，其特征在于，还包括步骤C)：对铅-IgE螯合物的鉴定；

其中，步骤C)中具体如下：

(1)制备胶床：以琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶中的一种作为介质制备胶床；

(2)加样：取步骤B)中提取纯化得到的铅-IgE螯合物，加入稀释缓冲液，并混匀，然后加样于样品槽中；

(3)电泳：连接电泳板，进行电泳；

(4)检测：在胶床上找出含铅的蛋白条带，将该蛋白条带取出并溶解，然后再采用ELISA法或ICP-MS法或AAS法检测是否含有铅以及检测铅的含量。

5.一种如权利要求1所述的铅-IgE螯合物在制备检测血样中铅-IgE螯合物的试剂或试剂盒中的应用。

6.一种至少包括如权利要求1所述的铅-IgE螯合物作为标准品的试剂盒。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，还包括包被液，该包被液含有捕获IgE的物质或捕获铅的物质。

8.一种定量检测铅-IgE螯合物的方法，其特征在于，以已知含量的权利要求1所述的铅-IgE螯合物作为标准品，采用以下方法之一对样品进行检测：酶联免疫法、酶联免疫与原子吸收光谱结合法、酶联免疫与电感耦合等离子体质谱结合法、提纯铅-IgE螯合物与酶联免疫结合法、提纯铅-IgE螯合物与原子吸收光谱结合法、提纯铅-IgE螯合物与电感耦合等离子体质谱结合法、电泳与酶联免疫或原子吸收光谱或电感耦合等离子体质谱结合法。