[发明专利]一种铅-IgE螯合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及检测领域，更具体地说，涉及一种铅-IgE螯合物及其制备方法和应用。

背景技术

IgE主要由粘膜相关淋巴样组织产生，其中大部分是由胃肠淋巴样组织所合成，少部分由呼吸道、唾液腺和生殖道粘膜组织合成。哺乳期产妇腺组织含有大量IgE产生细胞，这些细胞主要来自胃肠。在人类，还有少量的IgE来自骨髓。人出生后4～6月开始合成IgE，4～12岁血清中含量达成人水平，血清型IgE总Ig的10％左右，半衰期约5～6天。IgE有IgE1和IgE2两个亚类。IgE1主要存在于血清中，约占血清中IgE的85％，α1链分子量为56kD；IgE2主要存在于外分泌液中，少部分以血清型IgE存在，约占血清中IgE的15％，α2链缺乏铰链区，分子量为52kD。血清中的IgE除单体形式外还有由J链共价相连的二聚体或三聚体等形式。分泌型IgE是由J连接的双体和分泌成分所组成，主要存在于初乳、唾液、泪液、胃肠液、支气管分泌等外分泌液中，是粘膜局部免疫的最重要因素，分泌型IgE通过与相应的病原微生物(如脊髓灰质炎病毒)结合，阻抑其吸附到易感细胞上，分泌型IgE还可中和毒素如霍乱弧菌毒素和大肠杆毒素等。新生儿易患呼吸道、胃肠道感染可能与IgE合成不足有关。慢性支气管炎发作与分泌型IgE的减少也有一定关系。产妇可通过初乳将分泌型IgE传递给婴儿，这也是一种重要的自然被动免疫。嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和巨噬细胞表达FcαR,血清型单体IgE可介导调理吞噬和ADCC作用。此外，分泌型IgE具有免疫排除功能，即分泌型IgE结合饮食中大量的可溶性抗原以及肠道正常菌群或病原微生物所释放的热原物质，防止它们进入血液。

众所周知，铅(Pbckel，Pb)与人体的健康息息相关，首先其是人体维持健康所必需的微量元素，其存在于多种氢化酶中，催化氢的氧化还原反应，参与多种酶蛋白的合成和细胞激素及色素的代谢，具有促进铁的吸收和红细胞的增长、激活酶形成辅酶、增强胰岛素、降血糖、保护心血管等作用，因此如果人体缺乏铅，会导致疾病的发生。但是，事实在生活中，由于环境污染，人体内很少缺乏铅，相反铅的含量常常过量，常常导致疾病的发生，甚至危及生命。

铅在体内的含量超过一定水平就会对健康引起难以恢复的损害,它可以铅烟，铅尘和各种氧化物形式被人体经呼吸道和消化道摄入体内，通过与钙离子的竞争作用,氧化损伤,细胞凋亡等机制，引起以神经、消化、造血系统障碍为主的全身性、渐进性、持久性不可逆性疾病，而且其危害还可能遗传到下一代。贫血是铅中毒的早期症状之一，铅可抑制血红素合成过程中许多酶的活性。铅中毒可致血管痉挛、腹绞痛、视网膜小动脉痉挛和高血压，时常导致细小动脉硬化。铅的肾损害常表现为间质性肾炎或萎缩性肾炎等病变，肾小管重吸收功能下降是早期的症状。铅接触还可能影响生殖功能，接触铅的女性发生不孕症、流产及死胎的机率增多，并可通过胎盘转移到胎儿身上。经口铅中毒者肝脏为主要受损器官之一,可引起肝肿大呈现黄疸，甚至肝硬变或肝坏死，肝损害可能是肝内小动脉痉挛引起局部缺血所致。铅引起卟啉代谢障碍、抑制含巯基酶,干扰植物神经。

铅与多种蛋白质之间关系密切，可以与多种蛋白质结合，抑制多种蛋白酶的活性。随着对铅毒性研究的深入，人们逐渐认识到铅与蛋白的相互作用在其致毒过程中扮演着重要的角色，被认为是了解铅的毒性机理的关键所在，因此，对铅和蛋白质相互作用的研究就显得愈发重要。而现在关于铅与蛋白质作用的机理仅是冰山一角，还有很多蛋白质与铅之间的关系还不清楚，因而加强对于铅与蛋白质之间的关系至关重要。

发明内容

针对铅污染严重的问题，本发明的目的在于提供一种铅-IgE螯合物及其制备方法，并建立铅-IgE螯合物的定性、定量检测方法，以便定量检测铅-IgE螯合物在评价一个地区铅污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中铅-IgE螯合物可以间接反映这个地区人群受铅污染的情况，从而间接反映这个地区铅污染程度。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种铅-IgE螯合物，铅离子与IgE通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。

本发明还提供一种上述的铅-IgE螯合物的制备方法，包括以下步骤：

A)铅与IgE的螯合反应：在提纯源于人体的IgE或按照生物学方法重组的IgE中加入铅离子进行螯合反应，得到反应溶液；

B)纯化铅-IgE螯合物的提取：采用免疫亲和层析法，去除反应溶液中未反应的IgE以及多余的铅离子，即得铅-IgE螯合物。

其中，体外合成法中所述步骤B)具体如下：