[发明专利]一种检测发热伴血小板减少综合征病毒的恒温扩增试剂盒及应用

说明书

本发明涉及一种试剂盒及其应用，尤其是一种检测发热伴血小板减少综合征病毒的恒温扩增试剂盒及应用，属于生物技术领域。本发明进一步提供含有寡核苷酸的检测发热伴血小板减少综合征病毒的恒温扩增试剂盒，包括以下组分：(1)RNA提取试剂；(2)恒温扩增反应液，包括1×Bst Buffer、甜菜碱、MgSO4、dNTPs、RNase抑制剂、Bst DNA聚合酶、AMV逆转录酶、灭菌去离子水、所述上下游链置换引物、上下游探针和一条交叉扩增引物；(3)阳性对照模板，为发热伴血小板减少综合征病毒M基因片段的体外转录产物；(4)阴性对照，灭菌去离子水。本发明具有检测灵敏度高、特异性强、操作步骤简单、可重复性高、反应时间短等特性，且整个反应过程均在同一温度下进行，仅需一个恒温仪器即可完成检测，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种试剂盒及其应用，尤其是一种检测发热伴血小板减少综合征病毒的恒温扩增试剂盒及应用，属于生物技术领域。

背景技术

发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)是威胁我国人民健康和公共卫生安全的重要新发传染病，其临床表现以发热伴血小板、白细胞减少和消化道症状为主要特征，重症死亡率高达15～30％。SFTS很容易与血液、消化、呼吸等多系统疾病相混淆，加上临床医生对其缺乏认知，给该病的诊断和鉴别诊断带来困难。发热伴血小板减少综合征病毒(SFTS virus,SFTSV)需要通过实验室手段进行确诊，常用的方法有病毒分离培养、病毒核酸检测和免疫学检测等。病毒分离和免疫学检测或是操作复杂、费时，不能快速得到检测结果，或是检测敏感度不够。当前，基于PCR技术(常规PCR或荧光定量PCR)对病毒核酸进行检测是对SFTS进行早期快速诊断的重要手段。PCR技术具有检测敏感性高，操作简单、快速等优点，然而其前期投入费用较大(对实验室功能分区以及PCR仪的依赖)，而且易受实验室污染而导致假阳性，加上SFTS为人兽共患自然疫源性疾病，多发生于山区和丘陵等医疗卫生条件相对较差的地区，所以，亟待建立一种快速、可靠的，适合基层单位和现场应用的SFTSV核酸检测技术。申请人检索发现以下相关专利申请：①新型布尼亚病毒环介导逆转录等温扩增检测方法及试剂盒，申请号：201510018039.0，公开了检测新型布尼亚病毒的方法和试剂盒，反应体系中添加了外源性染料，通过染料的颜色变化观察样品。②一种新布尼亚病毒的恒温扩增检测试剂盒及检测方法，申请号：201410795993.6，公开了快速检测新布尼亚病毒的试剂盒，并不能对核酸的逆转录步骤进行监测。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术存在的缺陷，提出一种检测发热伴血小板减少综合征病毒的恒温扩增试剂盒及应用，适合基层单位和现场应用的，能够快速、灵敏、准确地检测出发热伴血小板减少综合征病毒核酸。

本发明通过以下技术方案解决技术问题，首先提供一组检测发热伴血小板减少综合征病毒的寡核苷酸，包括上下游链置换引物、上下游探针和交叉扩增引物；

所述上下游链置换引物分别为

SFTS-M-F3：5′-TGGATGTTGGCCACTCTC-3′；

SFTS-M-B3：5′-TTCTTCTGATTCAGAACA-3′；

所述上下游探针分别为

上游5′端FITC标记探针

SFTS-M-DF5F：5′-FITC-GAGAGCTCATCCAAGGAT-3′；

下游5′端Biotin标记探针

SFTS-M-DF5B：5′-Biotin-AGCACAAGACCAAATGGGT-3′；

所述交叉扩增引物为

SFTS-M-CPR：