[发明专利]一种吸光光度测定维生素C的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种吸光光度测定维生素C的方法。

背景技术

目前，涉及维生素C测定方法的报道较多，如荧光法、2，6-二氯靛酚滴定法、光度分析法、化学发光法、电化学分析法及色谱法等，本发明采用光度分析法，其余关于维生素C的测定方法与本发明不同。

用光度分析法测定维生素C的报道有2，4-二硝基苯肼法：样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，4-二硝基苯肼作用生成红色脎，脎的含量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色测定。

二甲苯－二氯靛酚比色法：用定量的 2,6－二氯靛酚染料与试样中的维生素 C进行氧化还原反应，多余的染料在酸性环境中呈红色，用二甲苯萃取后比色，在一定范围内吸光度与染料浓度呈线性相关，用差减法计算维生素 C含量。

磷钼蓝分光光度法测定维生素C：在一定的反应条件下，维生素C可以定量地将磷钼酸铵还原成磷钼蓝，结合光度法测定维生素C。

金纳米微粒分光光度法测定维生素C的方法（CN101109697A，2007.08.30）：该法的显色体系由HAuCl₄溶液、柠檬酸三钠溶液和维生素C溶液组成，测量波长520nm，光度法测定。

一种新的维生素C的测定方法.《广西师范大学学报》.2003，第21卷（第1期），第350-35：该法的显色体系由维生素C与BT苯并噻唑组成，测量波长602nm，光度法测定。

上述涉及光度分析法测定维生素C的报道与本发明的一种吸光光度测定维生素C的方法的显色体系组成及化学反应原理不同。

本发明的一种吸光光度测定维生素C的方法，与上述所有的方法皆不同，未见文献报道，具体公开了碘酸钾溶液、维生素C溶液、淀粉溶液和硫酸溶液组成显色体系，600nm作测量波长，用吸光光度法测定维生素C的含量。本发明法具有简便、准确、微量、快速、使用的药品价廉易得无毒无公害和环保等优点，测定生物、药物等试样中的维生素C。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简便、准确、微量、快速、价廉和环保测定维生素C的方法，可用于测定生物、药物等试样中的维生素C。

一种吸光光度测定维生素C的方法，包括如下步骤：

（1）称取0.5000g维生素C（AR），用2%草酸溶液溶解，转入50mL容量瓶，，用2%草酸溶液定容，摇匀，得10.0mg/mL维生素C溶液，移取该溶液1.00mL于50mL容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀，得200μg/mL维生素C标准溶液；

（2）室温下，移取一定体积200μg/mL维生素C标准溶液于25mL容量瓶中，取维生素C标准溶液的体积范围在2.00～10.00mL；

（3）向容量瓶中加入4.00mL0.5%的淀粉溶液；

（4）向容量瓶中加入0.20mL0.200mg/mL碘酸钾溶液；

（5）向容量瓶中加入0.10mL0.15mol/L硫酸溶液，摇匀，放置20min；

（6）用蒸馏水快速定容，摇匀；用试剂作空白，测量波长为600nm，即刻测定吸光度A；

（7）依照（2）～（6）方法，用200μg/mL维生素C标准溶液制备浓度在16.0～80.0μg/mL一系列有浓度梯度的显色体系，用600nm波长测定吸光度A，用维生素C^-浓度c与A的对应关系，建立校准曲线，获得线性回归方程及相关系数；

（8）按上述（2）～（6）方法，测定某未知含维生素C溶液的显色体系的A’，依据（7）的线性回归方程计算出被测体系中维生素C的浓度。

显色体系在400～700nm作吸收曲线；确定测量波长为600nm（图1）。

一种吸光光度测定维生素C的方法，其特征是用碘酸钾溶液、维生素C溶液、淀粉溶液和硫酸溶液组成显色体系，形成速差动力学体系（图2）。

一种吸光光度测定维生素C的方法，其特征是该体系碘酸钾与微量的维生素C反应后有余量，碘酸钾再与I^-作用生成I₂后仍然有余量，余量的碘酸钾抑制了体系中I₂的歧化；体系的动力学表征为图2，图2表明在1200～1800s间，吸光值达到最大值，该时间段吸光值的波动率为0.335%，1800s后吸光值以0.122(%)/min速率下降。步骤（5）规定显色时间20min和用蒸馏水快速定容即刻测定吸光值，可使误差小于1%，满足分析操作和测定条件。