[发明专利]拟南芥AtACS2基因在棉花抗旱和早熟方面的应用

权利要求书

1.拟南芥AtACS2基因在棉花抗旱和早熟方面的应用，该基因编号为At1g01480，其CDS长度为1491bp，编码496个氨基酸，所编码蛋白属于ACC合成酶同功酶一种；其特征在于，将该基因加强表达后转染棉花，可获得抗旱、早熟不早衰的转基因棉花新品系，所述棉花为普通陆地棉。

2.如权利要求1所述拟南芥AtACS2基因在棉花抗旱和早熟方面的应用，其特征在于，拟南芥AtACS2基因加强表达并转染棉花的具体过程如下：

（1）将拟南芥AtACS2的CDS序列连接到载体上，构建重组表达载体；所述载体为pCMBIA super1300载体，具体过程为：

首先，以拟南芥AtACS2总RNA为模板，反转录制备cDNA；并设计引物序列如下：

上游引物：5'-CCGCGATGCCAGCTACCGATCCCAATTTCA-3'；

下游引物：5'-ATCGCAGCTACCCAGTTTAGCACC-3'；

以反转录制备的cDNA为模板进行PCR扩增，对扩增产物电泳并回收获得拟南芥AtACS2的CDS序列；

其次，将所获得的AtACS2的CDS序列与载体pCMBIA super1300分别进行双酶切；酶切产物回收后连接构建重组质粒表达载体pSuper1300-AtACS2；

（2）将步骤（1）所构建的重组质粒表达载体转化大肠杆菌DH5α细胞进行质粒扩增，扩增后回收重组质粒表达载体；

（3）转化陆地棉；选取将要张开花苞的棉花花朵，待其完成自花授粉后，将步骤（2）中所获得重组质粒注射进棉花花粉管，使重组质粒基因与刚完成受精的棉花胚珠基因进行整合；

（4）筛选获得阳性转基因棉，具体为：收获步骤（3）转化的T0代棉花种子，进行培育并筛选抗性呈现阳性植株；对所筛选T0代陆地棉植株进一步种植培育，分别检测棉花植株中AtACS2和GhACS2表达水平，将两者表达活性均显著高于其非转基因棉花对照的、且T2代以后的转基因棉花种子用于实际种植使用。

3.如权利要求2所述拟南芥AtACS2基因在棉花抗旱和早熟方面的应用，其特征在于，步骤（3）中所注射质粒浓度为10ng/µL，每朵棉花注射量为8~12µL。