[发明专利]一种超高效合相色谱法测定食品中维生素E含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及维生素E的定量检测领域，具体而言，涉及一种超高效合相色谱法测定食品中维生素E含量的方法。

背景技术

维生素E又称为生育酚，包括生育酚和三烯生育酚两类共8种化合物，即α、β、γ、δ生育酚和α、β、γ、δ三烯生育酚。维生素E是一种活性很高的天然抗氧化剂，能够保护细胞膜及低密度脂蛋白免受自由基引起的氧化，具有预防慢性疾病、心血管疾病、动脉粥样硬化和癌症的功能。其中，α生育酚抗氧化能力最强，目前被研究的最多。然而，其它三种生育酚同样具有促进人体健康的独特生物学特性。生育三烯酚也具有化学预防和维持神经营养的重要作用。

目前，多种方法被用于食品及食品添加剂中维生素E的定量分析，包括非水毛细管电泳法、高效液相色谱法、气相色谱法等。同时分析样品中八种维生素E异构体主要采用高效液相色谱法，该方法最主要的缺点是分析时间长、分离度低、有机溶剂用量大。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种超高效合相色谱法测定食品中维生素E含量的方法，所述的测定方法能在7min内快速分离并分别定量检测出食品中八种维生素E异构体的含量，具有检测速度快、有机溶剂用量少、分离度高、灵敏度高、再现性好等优点。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种超高效合相色谱法测定食品中维生素E含量的方法，包括下列步骤：

将质量为m的食品进行提取维生素E的预处理，得到体积为V的提取液；

采用超高效合相色谱仪分离并分别检测出所述提取液中八种维生素E异构体的含量，得到各自的质量浓度；所述八种维生素E异构体为：α、β、γ、δ生育酚和α、β、γ、δ三烯生育酚；

所述超高效合相色谱仪的检测条件为：色谱柱的直径为3.0mm、柱长为100mm、填料粒径为1.7μm，填料为2-乙基吡啶；流动相为超临界二氧化碳和甲醇/异丙醇(1:1)的混合液；采用梯度洗脱，其中，超临界二氧化碳在不同时间段的体积百分比为：0-2.0min为90％-100％，2.0-6.0min为75％-85％，6.0-6.2min为90％-100％；分析时间：4.5-6.0min；柱温：40-60℃；备压：1500-3000psi；进样量：0.2-10μL；流速：1.0-3.0mL/min；检测波长为294nm；

通过以下公式分别计算得到所述食品中八种维生素E异构体的含量：(质量浓度*V)/m。

上述测定方法先将食品中的维生素E提取出来，然后在超高效合相色谱仪中采用特定的洗脱条件，将α、β、γ、δ生育酚和α、β、γ、δ三烯生育酚这八种异构体分别选择性地分配，进而分离开，并定量检测出其浓度。最后代入公式(质量浓度*V)/m，计算出食品中八种维生素E异构体的含量。整个超高效合相色谱的检测过程不会超过7min，溶剂用量极少，并且谱图显示完全可以同时将八种维生素E异构体有效分离开。

上述测定方法适用于测定各种类型的食品，例如，植物组织(辣木叶)、水果(番木瓜)和食品添加剂(茶树油)等。

优选地，所述预处理的方法为：

先将食品打浆，再加入乙醇、维生素C溶液和氢氧化钾溶液进行皂化反应，得到皂化产物；

用乙醚对所述皂化产物进行萃取，收集提取物；

用乙醇溶解所述提取物，即得提取液。

该预处理方法对α、β、γ、δ生育酚和α、β、γ、δ三烯生育酚的提取率高，损失少。其中，加入维生素C溶液可以避免检测成分被氧化，乙醚萃取时对维生素E的选择性高，因此用乙醚萃取可以起到富集的效果，提高后期检测的准确度；最后用乙醇作为溶剂定容，既可以充分溶解维生素E，又不会对后续的色谱分离造成干扰。

优选地，进行皂化反应时，乙醇、维生素C溶液和氢氧化钾溶液的体积比为5.5-6.5：1：1.8-2.2，且维生素C溶液的浓度为0.1-0.2g/mL，氢氧化钾溶液的浓度为0.5-0.6g/mL。

采用上述比例的乙醇、维生素C和氢氧化钾，可以在几乎零氧化率的条件下将食品中的维生素E充分提取出来，提取率可以达到90％以上。

优选地，所述皂化反应的时间为30min以上。

皂化30min以后，反应基本达到饱和，如果再延长反应时间，提取率会提高，但相应的成本会急剧增加。

优选地，用乙醇溶解所述提取物之前还包括：

蒸馏回收乙醚。

回收的乙醚还可以用于下次萃取，通过该步骤实现降低能耗、绿色环保检测的目的。