[发明专利]一种检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素SEM的双抗夹心法

权利要求书

1.一种检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素M的双抗夹心法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）用包被抗体包被酶标板，洗板，用于洗去未与酶标板结合的包被抗体，该包被抗体为SEM单克隆抗体；

（2）加入封闭液对酶标板上多余结合位点进行封闭，洗板，用于洗去酶标板上多余封闭液；

（3）在酶标板上加入样品，孵育后洗板；

（4）以SEM兔抗血清为一抗加入酶标板，反应后洗板，再以辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为酶标二抗，反应后洗板；

（5）加入显色液使酶标板显色，然后加入硫酸终止反应，用酶标仪检测OD₄₅₀；

（6）将检测得到的OD₄₅₀值带入标准曲线即可求得样品中SEM的含量。

2.根据权利要求1所述的一种检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素I的双抗夹心法，其特征在于，所述步骤（1）的具体过程如下：用1.8~2.7μg/mL的SEM单克隆抗体包被酶标板，在4℃过夜。

3.根据权利要求1所述的一种检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素I的双抗夹心法，其特征在于，所述步骤（2）的具体过程如下：以5%~20%脱脂奶粉为封闭液，在37℃下封闭1~2 h。

4.根据权利要求1所述的一种检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素I的双抗夹心法，其特征在于，所述步骤（3）中样品孵育的温度为37℃，孵育的时间为60~90 min。

5.根据权利要求1所述的一种检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素I的双抗夹心法，其特征在于，所述步骤（1）中的包被抗体、步骤（2）中的封闭液、以及步骤（4）中的一抗和酶标二抗均采用pH=7.4的1×PBS进行稀释，一抗的稀释比例为1:2000~1:4000，酶标二抗的稀释比例为1:6000~1:8000。

6.根据权利要求5所述的一种检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素I的双抗夹心法，其特征在于，所述步骤（4）中一抗加入后在37℃下反应1 h；所述酶标二抗加入后在37℃下反应30~45 min。

7.根据权利要求1所述的一种检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素I的双抗夹心法，其特征在于，所述步骤（1）～步骤（4）中洗板的操作过程如下：倒去酶标板孔内液体，在吸水纸上拍干，用含0.05%Tween-20的PBST加满孔，静置3 min，反复洗涤3～5次。

8.根据权利要求1所述的一种检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素I的双抗夹心法，其特征在于，所述步骤（5）中显色液加入后在37℃避光显色7~10min；所述硫酸浓度为2 mol/L。

9.根据权利要求8所述的一种检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素I的双抗夹心法，其特征在于，所述显色液由10 mL显色液A、125 μL显色液B、15 μL 3% H₂O₂配置而成；其中显色液A由3.5 g的Na₂HPO_4·12H₂O、1.1 g的柠檬酸混合后加水至200 ml，并调节pH值至5.0后制得；显色液B由6 mg的3.3’,5,5’-四甲基联苯胺加入1mL二甲基亚砜混合制得。