[发明专利]含Endothelin-1的人类卵母细胞体外成熟培养液和应用

权利要求书

1.一种含Endothelin-1的人类卵母细胞体外成熟培养液在进行人卵母细胞培养中的应用：其特征在于，通过以下步骤实现：

（1）配制人类卵母细胞体外成熟培养液，A液：ET-1 100ng/ml，0.075IU/ml r-FSH，体积分数10%人血清替代物，溶剂为常规基础培养液，B液：ET-1 100ng/ml，0.075IU/ml r-FSH，0.5IU/ml hCG，体积分数10%人血清替代物，溶剂为常规基础培养液，常规基础培养液为G-IVF培养液；

（2）将人类卵母细胞体外成熟培养液放置于含6%CO₂，37℃，饱和湿度的恒温培养箱中平衡6小时以上；

（3）将未成熟卵母细胞-卵丘复合体在卵母细胞体外成熟培养液A液中漂洗两遍，随后将未成熟卵母细胞-卵丘复合体转移入新的A液中培养10小时；

（4）10小时后，将未成熟卵母细胞-卵丘复合体转移入B液中漂洗两遍，随后将卵母细胞-卵丘复合体转移入新的B液中培养14小时；

（5）14小时后，将未成熟卵母细胞-卵丘复合体转移至透明质酸酶溶液中吹打数次，再用剥卵针将卵母细胞周围的卵丘细胞小心剥除；

（6）在倒置显微镜下确认明显排出极体的Meiosis II卵母细胞为成熟的卵母细胞，将成熟的卵母细胞使用玻璃吸管小心转移至G-I培养液中，并置于含6%CO₂，37℃，饱和湿度的恒温培养箱中，即完成细胞培养。