[发明专利]盐酸左旋咪唑在水产品各组织中残留的检测方法

权利要求书

1.盐酸左旋咪唑在水产品各组织中残留的检测方法，其特征是：包括以下步骤，

步骤一、对超高效液相色谱仪UPLC紫外检测器的基础数值进行设定

色谱柱为2.1mm×50mm，粒径1.7μm，柱温为35℃，流动相V/V为0.05mol/L磷酸：乙腈＝85:15，三乙胺调pH至7，进样体积为5μl，紫外波检测波长为214nm，流速为0.4mL/min；

步骤二、盐酸左旋咪唑在水产品血浆中残留的提取

取水产品血浆样本1.0ml，放置于规格为15ml的离心管内，且向离心管中加入1ml硼酸缓冲液，振荡1min，继续向离心管中加入10ml的乙酸乙酯，漩涡振荡2min后，在4000r/min的条件下，置于离心机中离心5分钟，将离心管中的上清液转移至48位平行蒸发仪真空管中；

向经过上述操作的离心管中继续加入5mL乙酸乙酯，重复上述操作，合并两次操作获得的提取液，在45℃～55℃条件下，使用48位平行蒸发仪减压蒸发至无液体，向该蒸发后的真空管中加入200μl甲醇，进行震荡溶解，经0.22μm滤膜过滤待超高效液相色谱仪UPLC进行分析；

步骤三、盐酸左旋咪唑在水产品肌肉、肝胰脏以及肾脏中残留的提取

称取水产品肉质待检测样品5.00g放置于规格为50ml的离心管中，同时取5g在650℃下烘干4小时的无水Na₂SO₄加入离心管中，进行搅拌，再向该离心管中加入pH为9的1ml硼酸缓冲液，漩涡振荡2min，再向该离心管中加入15ml乙酸乙酯，涡旋振荡2min，继续超声10min，在4000r/min的条件下，置于离心机中离心10min，将该离心管中的有机相转移至规格为250ml的梨形瓶中；向该离心管中再加入10ml乙酸乙酯，按照上述方法继续对该离心管中的残渣进行提取，将获得的提取液合并至于上述梨形瓶中；

向上述操作后获得的装有乙酸乙酯提取液的250ml梨形瓶中加入0.1mol/L盐酸溶液15ml，震荡2min～3min后静置，分取下层备用；

取混合阳离子固相萃取小柱Waters Oasis MCX，规格为3ml/60mg，向固相萃取小柱中依次加入3ml甲醇、0.1mol/L盐酸溶液3ml进行活化；将所述步骤二中获得的的备用液过上述固相萃取小柱，弃去流出液，依次用3ml水和3ml甲醇淋洗上述固相萃取小柱，并吹至液体完全流出，取2ml 4％氨水甲醇溶液进行洗脱，保持流速为10滴/分钟～15滴/分钟，收集洗脱液于带刻度的玻璃离心管中，并定容至2ml，经0.22μm滤膜过滤后待超高效液相色谱仪UPLC分析；

步骤四、盐酸左旋咪唑在水产品中含量的结果测定

分别取浓度为0.1ug/ml、2.0ug/ml、10ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml盐酸左旋咪唑标准工作液上机测定，绘制标准曲线；

将所述步骤二和步骤三中超高效液相色谱仪UPLC分析的结果进行测定，采用外标法定量，且由定量结果得出水产品中盐酸左旋咪唑的含量。

2.根据权利要求1所述的盐酸左旋咪唑在水产品各组织中残留的检测方法，其特征是：所述步骤二中取水产品血浆样本1.0ml的误差值精确到0.01ml。

3.根据权利要求1所述的盐酸左旋咪唑在水产品各组织中残留的检测方法，其特征是：所述步骤三中取水产品肉质样本5.0g的误差值精确到0.01g。

4.根据权利要求1所述的盐酸左旋咪唑在水产品各组织中残留的检测方法，其特征是：所述硼酸缓冲液由6.18g硼酸与980ml水的混合液，加入10mol/L氢氧化钠溶液调pH值至9.0，补加水到1000ml获得。

5.根据权利要求1所述的盐酸左旋咪唑在水产品各组织中残留的检测方法，其特征是：所述4％氨水的甲醇溶液由96ml甲醇溶液中加入4ml氨水混合均匀获得。