[发明专利]盐酸左旋咪唑在水产品各组织中残留的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于盐酸左旋咪唑检测方法技术领域，特别是涉及到一种应用超高效液相色谱测定盐酸左旋咪唑在水产品组织中的检测方法。

背景技术

盐酸左旋咪唑，英文名称：Levamisole Hydrochloride，分子式：C11H12N2S·ClH，分子量：240.757，化学结构如图1所示。中文别名：(S)-6-苯基-2,3,5,6-四氢-咪唑[2,1-B]噻唑单盐酸盐；L-2,3,5,6-四氢-6-苯基咪唑[2,1-6]噻唑盐酸盐；驱虫速；左旋四咪唑；(S)-(-)-6-苯基-2,3,5,6-四氢咪唑并[2,1-b]噻唑盐酸盐；左旋咪唑盐酸盐；L-2,3,5,6四氢-6-苯基咪唑并(2,1-B)噻唑的盐酸盐；盐酸左旋四咪唑。

盐酸左旋咪唑为四咪唑的左旋体，活性约为四咪唑(消旋体)的1～2倍，但毒副作用则较低。是农牧业生产和兽医临床上常用的广谱、高效的咪唑类驱虫药，对蛔虫、钩虫、蛲虫和粪类圆线虫病有较好疗效，而且还具有免疫调节功能。在水产动物体内它主要通过提高吞噬细胞和嗜中性粒细胞的活性、刺激淋巴细胞的产生或分泌淋巴因子，提高白细胞的代谢能力以及血清溶菌酶活力，诱发抗体的产生及补体的生成等来增强机体的免疫力，可用于水产动物的抗菌消炎、抗病毒和促进生长以及鱼类粘孢子虫病防治等方面。随着其在养殖业中广泛的应用，盐酸左旋咪唑在水产品中的残留问题也日益突出。为保证水产品食用安全性，保障人民群众的身体健康，加强水产品中的盐酸左旋咪唑残留的监督和检验工作，建立一种简单快速、灵敏度高的检测方法已是刻不容缓。目前，以畜、禽、药品为研究对象的盐酸左旋咪唑检测方法已有少量报道，主要采用的是滴定法、气质联用法和高效液相色谱法。而应用超高效液相色谱法的检测方法未见报道。

现有技术中测定盐酸左旋咪唑的滴定法：利用滴定法测定盐酸左旋咪唑的含量，人为因素误差大，基质干扰大，准确度低，对检出限有一定的限制，对于微量样品或者基质复杂样品的测定来说，滴定法显得力不从心。

现有技术中测定盐酸左旋咪唑的气质联用法：是利用气相色谱和质谱联用对化合物分离鉴定，检出限最低可达0.25ppm，该法虽是一种较好的定性确证方法，但仪器昂贵，不易普及。

现有技术当中测定盐酸左旋咪唑的高效液相色谱法：是利用高效液相色谱对化合物进行分离，然后利用化合物的紫外特性进行定性定量鉴定，但检测时间均较长。近年来,随着科学技术的进步和工业发展,各领域对液相色谱技术的要求日益提高。2004年研发出了基于小颗粒填料的液相色谱技术—超高效液相色谱(UPLC)，并成功地应用于各分析行业。UPLC采用了较小的1.7μm颗粒度的色谱柱填料，提高了柱效和分析速度，减少流动相溶剂消耗，弥补了传统高效液相色谱(HPLC)系统的不足。UPLC超高的分析速度极大地提高了大批量样品的分析效率。因此，本检测方法选用UPLC。

现有的盐酸左旋咪唑残留的检测方法中，很少系统地研究流动相的选择与配比以及流动相的pH值对出峰时间、峰形的影响。而且多数选择用磷酸二氢钠(钾)盐，而本方法中研究了不同pH的磷酸、磷酸二氢钠(钾)、水和乙腈作为流动相的区别，根据色谱结果，最终选择了pH＝7的磷酸溶液,一定pH值的磷酸溶液与乙腈的比例定为85:15，避免了使用盐给仪器和实验带来的麻烦。

现有的盐酸左旋咪唑残留的前处理方法中，以猪、牛、鸡等组织为研究对象的盐酸左旋咪唑残留检测方法虽有报道但较少，水产品各组织中残留的检测方法系统研究未见报道。而随着盐酸左旋咪唑在水产养殖业的应用，如果饲养过程中没有正确合理地使用该类药物，将导致其残留，给人体健康造成危害。由于此药物在鱼类体内的药代动力学及药残等方面的基础研究几乎属于空白。所以急需一个适宜的检测方法为此药物在鱼体中的药代动力学参数及其药残方面的研究提供基础。因此现有技术当中亟需要一种新型的技术方案来解决这一问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种盐酸左旋咪唑在水产品各组织中残留的检测方法，通过对前处理技术的优化、合理化组合，获得了良好的提取、净化效果；同时对超高效液相色谱条件进行了摸索和确证；提高了检测方法灵敏度、重复性和准确度，尤其使检测分析速度加快了数倍，减少试剂浪费、降低环境污染，适合大批量样品的残留检测。

盐酸左旋咪唑在水产品各组织中残留的检测方法，其特征是：包括以下步骤，

步骤一、对超高效液相色谱仪UPLC紫外检测器的基础数值进行设定