[发明专利]一种高效分离松茸菌种的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效分离松茸菌种的方法。

背景技术

松茸(Tricholomamatsutake)，又称松口蘑，是著名的食药用真菌，具有很高的药用价值及多种生物活性。现代医学研究表明松茸具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗糖尿病、抗炎，治疗心血管病等功效；同时又因其具有良好的防辐射保健功能，在国际上广受人们追捧，具有极高的经济价值。

松茸生长条件特殊，需要在特定环境下与松属、栎属的须根产生共生关系，形成菌根，才能进一步长出子实体。松茸的生产只能采取半人工方式，用人工培养的菌丝在自然条件下的寄主根部诱导形成菌塘或菌落，最终发育成子实体。因此分离获得并培养松茸纯菌丝体对松茸的生产、研究具有十分重要的意义。目前公认的分离松茸菌丝体最佳的方法是利用子实体的菌褶部位，但这种分离方法依然存在着一些问题，如利用菌褶分离成功率依然不理想、易污染、菌丝在培养基上生长速度极其缓慢，难以迅速扩增等。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供的是一种高效分离松茸菌种的方法，采用本方法使得菌丝萌发快，长势强。

本发明所采用的技术如下：一种高效分离松茸菌种的方法，如下：挑选松茸子实体时选择外观典型、大小适中、菌肉肥厚、颜色正常且尚未开伞的子实体，将松茸子实体用质量浓度75％酒精棉擦洗2-3次，放入已灭菌的超净工作台中；将松茸子实体沿菌盖与菌柄交界处掰开，再将菌盖表面表皮连同菌幕撕下，露出无菌的菌肉与菌褶部分；用无菌镊子夹住菌盖边缘，夹取1-2cm³大小的组织块，夹取的组织块既包括上层的菌肉又包括下层的菌褶部分；此时平板培养基温度在60℃左右，尚未凝固，用组织块的菌肉部分蘸取少量未凝固培养基，菌褶部分不与培养基接触，将组织块粘于培养皿盖内表面正中间，菌褶部分向下，组织块与培养基距离0.6cm；盖上盖封口保存，在25℃黑暗条件下正置培养，组织块的菌肉部分向菌褶供给营养，使菌褶成熟并喷洒孢子，成熟的孢子喷洒至培养基上萌发成纯菌丝体。

本发明还具有如下技术特征：

所述的培养基配方为：

桑黄菌丝体6d发酵液200ml/L，马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂14g/L，维生素A1.5mg/L、维生素B₁2.5mg/L和维生素B₂2.5mg/L；

所述的桑黄菌丝体6d发酵液：在300mlPD液体培养基中接入桑黄斜面种，斜面种培养基为PDA，25℃避光培养7d，25℃振荡培养，160r/min，培养6d后，过滤得到发酵液；桑黄菌种来源于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏号：桑黄DL101CCTCCM2011137。

本发明具有如下技术特点：

1、使用本发明分离松茸菌种的成功率高达90％以上，且操作简单易行，所需材料少；

2、孢子分离使用的是松茸的成熟孢子，具备双亲的遗传特性，生命力强，培育出的菌种质量好，优于一般的组织分离；

3、该分离方法中，组织块不与培养基直接接触，避免了一些杂菌污染，大大降低了污染率。

4、使用本发明中的培养基培养松茸孢子，萌发率高，菌丝粗壮，生长速度快，形成明显的气生菌丝。

具体实施方式

下面举例对本发明做进一步说明：

实施例1

一、培养基配方：

桑黄菌丝体6d发酵液200ml/L，PDA：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂14g/L，维生素A1.5mg/L、维生素B₁2.5mg/L、维生素B₂2.5mg/L。

具体操作方法，1L培养基为例：马铃薯去皮，称取200g，切成大约1cm³的小块，加水500ml，煮沸后维持沸腾20min，过滤得滤液。将滤液与200ml桑黄菌丝发酵液混合，加入维生素A1.5mg、维生素B₁2.5mg、维生素B₂2.5mg，加热搅拌至完全溶解，定容到1000ml。分装到三角瓶中，高压蒸汽灭菌121℃，0.105MPa，20min。