[发明专利]一种利用寡聚核苷酸探针染液涂染染色体的新方法

权利要求书

1.一种利用寡聚核苷酸探针染液涂染染色体的方法，开发寡核苷酸探针染液的探针序列特征如下：

2.一种利用寡聚核苷酸探针染液涂染染色体的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)合成单链寡核苷酸探针(GAA)5、(GAA)10、(GAA)19、pSc119.2-1、pAs1-1、pAs1-2、pAs1-3、pAs1-4、pAs1-5和pAs1-6，其中(GAA)5序列为GAAGAAGAAGAAGAA，其它寡核苷酸探针序列同权利要求1所述方法中使用的探针序列；

(2)利用非变性荧光原位杂交对步骤(1)中不同长度的寡聚核苷酸探针(GAA)5、(GAA)10、(GAA)19进行浓度效应实验，发现(GAA)10能够在极低浓度下高效涂染染色体，同理发现pSc119.2-1、pAs1-1、pAs1-3、pAs1-4、pAs1-5和pAs1-6能够在低浓度下涂染染色体；

(3)根据原位杂交信号强度选择各探针最优浓度，0.01ng/μl(GAA)10、0.2ng/μlpSc119.2-1、0.3ng/μl pAs1-1、10ng/μl pAs1-3、10ng/μl pAs1-4、0.3ng/μl pAs1-5和10ng/μl pAs1-6；

(4)按照步骤(3)中探针浓度配比，将不同探针混合加在灭菌的2×SSC中，SSC为0.015MC6H5Na3O7.2H2O-0.15M NaCl；

(5)将准备好的根尖中期染色体制片置于步骤(4)中探针染液中，37℃杂交6h后，取出载玻片，用蒸馏水冲洗3次，滴加6μl VECTASHIELD Mounting Medium for Fluorescencewith DAPI，盖上盖玻片，在荧光显微镜下观察照相。

3.权利要求2所述的利用寡聚核苷酸探针染液涂染染色体的方法在涂染小麦、黑麦中的应用。

4.一种寡聚核苷酸探针染液的探针，其特征在于，探针序列特征如下：

5.权利要求4所述的寡聚核苷酸探针在制备涂染小麦、黑麦试剂、试剂盒中的应用。

6.权利要求4所述的寡聚核苷酸探针在涂染小麦、黑麦中的应用。