[发明专利]一种转基因小麦B73‑6‑1的品系特异性定量PCR检测试剂盒及应用有效
| 申请号： | 201510428830.9 | 申请日： | 2015-07-21 |
| 公开（公告）号： | CN104988236B | 公开（公告）日： | 2018-01-16 |
| 发明（设计）人： | 张明辉;于微;高学军;甄贞;刘营;仇有文 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙)11419 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 150030 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 转基因 小麦 b73 品系 特异性 定量 pcr 检测 试剂盒 应用 | ||
1.一种转基因小麦B73-6-1的品系特异性定量PCR检测试剂盒，其特征在于，包括B73-6-1品系的特异性引物和探针以及内源参照基因的引物和探针；所述B73-6-1的品系特异性引物及探针是根据B73-6-1中HMW-GS 5′端上游旁侧序列设计的；所述内源参照基因是根据GAG56D小麦醇溶蛋白基因设计的；所述B73-6-1中HMW-GS 5′端上游旁侧序列如SEQ ID NO.7所示；所述B73-6-1的品系特异性引物核苷酸序列如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。
2.权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述内源参照基因的引物核苷酸序列如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示。
3.权利要求1所述试剂盒在转基因小麦B73-6-1品系的定量检测中的应用。
4.权利要求3所述应用，其特征在于，利用核苷酸序列为SEQ ID NO.8-10所示的B73-6-1的品系特异性引物和探针以及SEQ ID NO.11-13所示的内源参照基因的引物和探针进行PCR反应，对转基因小麦B73-6-1进行特异性定量PCR检测。
5.权利要求3所述应用，其特征在于，所述PCR反应，条件为：预变性95℃30s；扩增95℃5s，60℃31s，40个循环。
6.权利要求3所述应用，其特征在于，所述PCR反应，每20μL定量扩增体系含有：待测样品DNA100ng，上游引物和下游引物各0.2μM，探针0.4μM，Taqman探针荧光染料1×，ROX参比染料1×，灭菌蒸馏水补足至20μL。
7.根据权利要求3所述应用，其特征在于，具体步骤如下：
1)提取待测样品DNA；
2)以样品DNA为模板，利用核苷酸序列为SEQ ID NO.8-10所示的B73-6-1的特异性引物和探针进行荧光定量PCR反应；以内部参照基因为模板，利用核苷酸序列SEQ ID NO.11-13所示的特异性内源参照基因的引物和探针进行荧光定量PCR反应；设置空白对照；所述PCR反应条件为：预变性95℃30s；扩增95℃5s，60℃31s，40个循环；所述PCR反应，每20μL定量扩增体系含有：待测样品DNA100ng，上游引物和下游引物各0.2μM，探针0.4μM，Taqman探针荧光染料1×，ROX参比染料1×，灭菌蒸馏水补足至20μL。
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