[发明专利]一种黄霉素A组分的分离纯化方法

权利要求书

1.一种黄霉素A组分的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将黄霉素发酵液pH值调节至3.0～4.5，于4℃冷藏过夜，离心，取上清液；

2)将上清液以1～3BV/hr的流速连续流过聚甲基丙烯酸酯类大孔吸附树脂层析柱，控制黄霉素A组分的载量为15～30g/L，然后进行梯度洗脱，收集馏分，合并富集黄霉素A组分的洗脱液；

所述的梯度洗脱为：依次用2BV去离子水、1BV 20％甲醇水溶液、1BV 40％甲醇水溶液、3BV 60％甲醇水溶液及2BV 80％甲醇水溶液进行洗脱，洗脱流速为1～3BV/hr；

3)将富集黄霉素A组分的洗脱液的pH值调节至5.0～8.0，以1～20BV/hr流速连续流过装填有阴离子交换树脂的层析柱，然后进行洗脱，收集脱溶剂后的黄霉素A组分洗脱液；

富集黄霉素A组分的洗脱液与阴离子交换树脂的体积比为4～10：1，所述的阴离子交换树脂为带有季胺基或叔胺基的离子交换树脂；

所述的洗脱为：依次用2BV去离子水及5BV缓冲溶液进行洗脱，缓冲液的pH值为3.5，缓冲液中含有67mM的KH₂PO₄及1M的NaCl；洗脱流速为1～20BV/hr；

4)将脱溶剂后的黄霉素A组分洗脱液的pH值调节至3.0～4.5，以50～250cm/hr的流速泵入装填有反相色谱填料的层析柱，然后以相同的流速先进行线性梯度洗脱，再进行等梯度洗脱，直至黄霉素A组分完全解吸，合并高纯度黄霉素A组分，去除溶剂后冷冻干燥，得到黄霉素A组分。

2.根据权利要求1所述的黄霉素A组分的分离纯化方法，其特征在于，步骤1)所述的离心是在8000r/min的条件下离心10min。

3.根据权利要求1所述的黄霉素A组分的分离纯化方法，其特征在于，步骤4)中所用的反相色谱填料孔径为粒径为20～75μm；反相色谱填料为硅胶改性的C8、C18填料，或者为聚合物基质的色谱填料。

4.根据权利要求3所述的黄霉素A组分的分离纯化方法，其特征在于，所述的聚合物基质为苯乙烯-二乙烯苯聚合物或聚甲基丙烯酸酯类聚合物。

5.根据权利要求1所述的黄霉素A组分的分离纯化方法，其特征在于，步骤4)中先进行线性梯度洗脱，再进行等梯度洗脱的具体操作为：

以pH值为8.30的20％甲醇溶液为A流动相，以纯甲醇为B流动相，按照0～40％B流动相线性梯度洗脱40min，再用40％B流动相等梯度洗脱至黄霉素A组分完全解吸。

6.根据权利要求1所述的黄霉素A组分的分离纯化方法，其特征在于，步骤4)中装填有反相色谱填料的层析柱采用20×250mm的层析柱。