[发明专利]高效液相色谱法测定金霉素预混剂含量及相关物质的方法

说明书

技术领域

本发明属于分析测试领域，涉及一种预混剂含量及相关物质的检测方法，特别涉及一种高效液相色谱法测定金霉素预混剂含量及相关物质的方法。

背景技术

金霉素预混剂是金霉素生产菌的全发酵液与适量碳酸钙制成的金霉素钙盐，其中的药物成分主要是金霉素，但是，也含有一些相关的发酵副产物，如四环素，差向金霉素等。其金霉素含量测定一般采用微生物检测法(兽药国家标准收载)。实践表明，采用微生物法测定含量有几个弊端：1)方法繁琐，耗时较长，造成工作效率低；2)方法的影响因素多，对测试的准确度有较大的影响，测试的重复性与再现性也相对较差；3)测试成本较高；4)不能同时测定其中的相关物质。

《中国药典》(2005版)收载了盐酸金霉素，其含量及相关物质检测采用HPLC法，可以用于金霉素预混剂的测定，但是，其色谱条件比较复杂、苛刻，流动相使用草酸铵、磷酸氢二铵及二甲基甲酰胺的混合溶液(用氨试液调PH8.3)。该方法虽然比微生物检测法方便、快捷，但是具有如下缺点：1)流动相PH8.3为碱性条件，金霉素在碱性条件下极不稳定，易氧化降解；2)使用含盐流动相，盐类很容易结晶吸出，造成仪器系统配件磨损，缩短仪器的寿命，对色谱系统的维护保养不利，不适宜长期使用；3)一般色谱柱允许流动相的pH为2.0-7.5，而该方法流动相的pH为8.3，需要配备耐碱性的专用色谱柱，造价较一般色谱柱要高。

《中国药典》(2010版)收载的盐酸金霉素，含量及相关杂质检测仍采用HPLC法，也可以用于金霉素预混剂的检测，该方法虽然克服了2005版的缺点，调整了色谱条件，将流动相改为酸性条件；但是，其流动相仍然比较苛刻，使用高氯酸、水和二甲亚砜混合溶液。高氯酸为强氧化性酸，长期使用会使仪器系统造成腐蚀，缩短色谱柱及仪器的寿命，仍然对仪器的维护保养不利，不适宜长期使用；另外一个缺点就是，二甲亚砜的价格较贵约为二甲基甲酰胺价格的二倍，长期使用，成本也较高。

针对上述情况，需要发明一种既可以进行准确可靠的测试，又能在长期使用中有利于仪器的维护保养，还能够节约成本的经济实惠的检测方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测效率高、准确可靠的运用高效液相色谱法检测金霉素预混剂含量及相关物质的方法，本检测方法对仪器磨损、腐蚀较小，实验成本低，适宜于长期使用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

高效液相色谱法测定金霉素预混剂含量及相关物质的方法，采用如下色谱条件：

色谱柱：(C18，5um)色谱柱；

流动相：以体积比为63～77:1.8～2.2:25～30的水、磷酸、N,N-二甲基甲酰胺的混合溶液为流动相，所述磷酸浓度为2mol/L；

流速：0.8～1.2ml/min；

检测波长：270～400nm；

柱温：30～40℃；

优选的，所述流动相中水、磷酸、N,N-二甲基甲酰胺的体积比为70：2：28。

优选的，检测条件中流速为1mL/min，检测波长为365nm，柱温为35℃。

金霉素预混剂中相关物质包括四环素和差向金霉素。

检测方法通过以下步骤实现：

(1)标品溶液配制：取金霉素标准品、四环素标准品、差向金霉素标准品用0.01mol/L盐酸稀释分别配制成标品溶液，过0.22μm滤膜，备供试标品溶液用；

(2)金霉素预混剂试样品溶液配制：取金霉素预混剂样品用0.01mol/L盐酸稀释配制成试样品溶液，过0.22μm滤膜，备供试样品溶液用；

(3)取相同体积的供试标品和样品溶液，注入高效液相色谱仪，按照所述的条件进行高效液相色谱分析。

用峰面积外标法计算相关物质含量：

A_样：样品中相应组分的峰面积；

A_标：相应标品的峰面积；

C_标：相应标品溶液的浓度。

优选的，所述金霉素标品溶液浓度为200μg/mL，所述四环素标品溶液浓度为16μg/mL，所述差向金霉素标品溶液浓度为12μg/mL，所述金霉素预混剂试样品溶液溶度为1～2mg/mL。

本发明的有益效果在于：

(1)色谱条件相对温和(流动相不含易结晶的盐类，也不使用强酸)，有利于仪器的维护保养，降低了仪器的长期、连续使用而导致磨损与腐蚀，可以延长仪器的寿命，提高仪器的利用率；