[发明专利]一株牡丹内生真菌及该菌生产丹皮酚的工艺

权利要求书

1.一株牡丹内生真菌，分类命名为毛壳菌属（Chaetomium sp）J1-2, 已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTCC NO: M2014661，保藏日期为2014年12月24日。

2.利用权利要求1所述牡丹内生真菌生产丹皮酚中的工艺，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、将分离到的单一菌株进行扩大培养：分离到的牡丹内生真菌接种到装有固体扩大培养基的培养皿中，倒置在25 ℃恒温培养箱中培养25天，待菌丝成熟，得到扩大培养后牡丹内生真菌，备用；

所述固体扩大培养基的制备方法为：每升固体扩大培养基，取新鲜马铃薯200 g，切块，用蒸馏水煮沸30 min，四层纱布过滤取滤液，之后加入葡萄糖20 g，琼脂17 g充分溶解后再用蒸馏水补足到1000 mL；将配成的固体扩大培养基在121℃下灭菌30min后，在超净工作台内分装至无菌培养皿中，备用；

步骤二、将扩大培养后牡丹内生真菌接种到装有液体培养基的三角瓶中，放入25 ℃气浴摇床中，以150 r/min的转速，震荡培养9-13天，得到培养后牡丹内生真菌菌液，备用；

所述液体培养基的制备方法为：每升液体培养基，取新鲜马铃薯200 g，切块，用蒸馏水煮沸30 min，四层纱布过滤取滤液，之后加入葡萄糖20 g，酵母粉10g，硫酸亚铁1g，硫酸锌0.15g，充分溶解后再用蒸馏水补足到1000 mL，在121 ℃下灭菌30 min，备用；

步骤三、对培养后牡丹内生真菌菌液进行抽滤，将抽滤所得新鲜菌丝称重，在新鲜菌丝中按照每1 g新鲜菌丝20 mL甲醇的量添加甲醇，然后进行研磨，得到混合液；将混合液装入磨口带塞三角瓶内，在室温下进行超声浸提30 min，浸提后静置，取上清液置于离心管中，以12000 r/min的转速离心5 min，所得上清液即为含丹皮酚的提取液；将含丹皮酚的提取液放入4℃冰箱过夜使丹皮酚结晶，得到丹皮酚。

3.如权利要求2所述牡丹内生真菌生产丹皮酚中的工艺，其特征在于：所述浸提后静置的时间为20-30min。

4.如权利要求2所述牡丹内生真菌生产丹皮酚中的工艺，其特征在于：所述超声浸提的超声频率范围为50-100Hz。

5.如权利要求2所述牡丹内生真菌生产丹皮酚中的工艺，其特征在于：所述步骤三的替换方法为：对培养后牡丹内生真菌菌液进行抽滤，将抽滤所得新鲜菌丝称重，在新鲜菌丝按照每1 g新鲜菌丝10 mL去离子水的量添加去离子水，然后进行研磨，得到混合液；然后将混合液采用挥发油提取器进行提取，收集下层挥发油；将所得挥发油放入4℃冰箱过夜使丹皮酚结晶，得到丹皮酚。

6.如权利要求1所述的牡丹内生真菌在生产丹皮酚中的应用。