[发明专利]一种类风湿因子吸附剂

权利要求书

1.一种抗人IgG抗原的多克隆抗体，其特征在于：其制备方法包括：

(1)制备人IgG抗原；

(2)用人IgG抗原进行动物免疫；

(3)从免疫后的动物体内取血；

(4)依次用饱和硫酸铵盐析法和亲和层析法对血清纯化，得到多克隆抗体。

2.如权利要求1所述的多克隆抗体，其特征在于，所述的步骤(1)中通过盐析沉淀法、亲和层析法、电泳法、等电点沉淀法或离子交换法中的一种或多种制备人IgG抗原。

3.如权利要求1所述的多克隆抗体，其特征在于，所述的步骤(2)中动物选自小鼠、大鼠、豚鼠、兔、鸡、羊、马、猪、驴中的一种或两种以上；所述的免疫采用皮下注射法、脾内注射法、静脉注射法、腹腔注射法中的一种；所述的免疫的免疫剂量为10-800μg/只/次。

4.如权利要求1所述的多克隆抗体，其特征在于，所述的步骤(3)中，从免疫后的动物体内取血前，还包括测定免疫后动物的血清效价的步骤。

5.如权利要求1所述的多克隆抗体，其特征在于，所述的步骤(4)中，所述的饱和硫酸铵盐析沉淀法包括：取步骤(3)得到的血清，加等体积的生理盐水，再加入饱和硫酸铵溶液，0-10℃沉淀过夜；10000G离心5-20min，弃上清，将沉淀用磷酸盐缓冲液溶解，缓慢滴加饱和硫酸铵溶液，0-10℃静置0.5-2h；10000G离心5-20min，弃上清，将沉淀用磷酸盐缓冲液溶解，用磷酸盐缓冲液0-10℃透析过夜；

和/或，所述的步骤(4)中，所述亲和层析法包括：用5-10倍柱床体积的洗脱缓冲液洗柱；用5-10倍柱床体积的偶联缓冲液洗柱；将用饱和硫酸铵盐析法初步纯化过的样品上样；用5-10倍柱床体积的偶联缓冲液洗柱；用2-5倍柱床体积的洗脱缓冲液洗脱，得到抗人IgG抗原的多克隆抗体。

6.如权利要求1-5任一项所述的一种抗人IgG抗原的多克隆抗体，其特征在于，用人IgG抗原包被，间接法ELISA检测显示其效价不低于1:5×10⁵。

7.一种抗人IgG抗原的多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括：

(1)制备人IgG抗原；

(2)用人IgG抗原进行动物免疫；

(3)从免疫后的动物体内取血；

(4)依次用饱和硫酸铵盐析法和亲和层析法对血清纯化，得到多克隆抗体。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，包括：(1)制备人IgG抗原：通过盐析沉淀法、亲和层析法、电泳法、等电点沉淀法或离子交换法中的一种或多种制备人IgG抗原；

(2)用人IgG抗原进行动物免疫：将步骤(1)得到的人IgG抗原与弗氏完全佐剂等体积混合，充分乳化后对动物进行皮下多点注射，免疫剂量为每只动物10-800μg，初次免疫后每2-4周免疫1次，免疫次数≥3次；

(3)从免疫后的动物体内取血：测定免疫后动物的血清效价后，用颈动脉放血的方法采血，待血液凝固，血清分离出后，离心，取上清；

(4)依次用饱和硫酸铵盐析法和亲和层析法对血清纯化，得到多克隆抗体；

所述的饱和硫酸铵盐析沉淀法包括：取步骤(3)得到的血清，加等体积的生理盐水，再加入饱和硫酸铵溶液，0-10℃沉淀过夜；10000G离心5-20min，弃上清，将沉淀用磷酸盐缓冲液溶解，缓慢滴加饱和硫酸铵溶液，0-10℃静置0.5-2h；10000G离心5-20min，弃上清，将沉淀用磷酸盐缓冲液溶解，用磷酸盐缓冲液0-10℃透析过夜；

所述的亲和层析法包括：用5-10倍柱床体积的洗脱缓冲液洗柱；用5-10倍柱床体积的偶联缓冲液洗柱；将用饱和硫酸铵盐析法初步纯化过的样品上样；用5-10倍柱床体积的偶联缓冲液洗柱；用2-5倍柱床体积的洗脱缓冲液洗脱，得到抗人IgG抗原的多克隆抗体。

9.如权利要求1-6任一项所述的多克隆抗体或如权利要求7-8任一项所述的制备方法制得的多克隆抗体在制备类风湿因子吸附剂中的应用。

10.如权利要求1-6任一项所述的多克隆抗体或如权利要求7-8任一项所述的制备方法制得的多克隆抗体在制备检测IgM抗体的试剂盒中的应用。