[发明专利]一种类风湿因子吸附剂

说明书

技术领域

本发明涉及免疫领域，特别是用于针对人血清IgG抗原的一种多克隆抗体及类风湿因子吸附剂及其制备方法。

背景技术

类风湿因子(rheumatoid factor，RF)是一种抗变性IgG的自身抗体，能特异地与IgGFC片段上抗原表位结合，可分为IgM、IgA、IgG、IgD、IgE五型，其中IgM约占80％左右。

随着临床诊断的需要，IgM型试剂盒需求量大增。在检测过程中，由于类风湿因子属于IgM型抗体，在不同程度上对检测结果会起到干扰作用，特别是在弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、人幽门螺旋杆菌IgM抗体检测中，由于存在较多类风湿因子，IgM的检测更易受到干扰。

目前国内检测IgM型抗体的试剂盒普遍使用的是捕获法ELISA，血清中针对某些抗原的特异性IgM经常和非特异性IgM以及特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM的测定。捕获法原理是先用抗人IgM抗体包被固相载体，使血清中所有IgM均固定在固相上，经洗涤去除IgG后，再测定特异性IgM。此方法操作复杂，灵敏度较低。

添加类风湿因子吸附剂能够很好地解决检测准确性低、操作复杂及灵敏度低的问题。现有技术中有采用蛋白A吸附剂、戊二醛交联IgG、热聚IgG、疏水氨基酸免疫吸附剂等方法消除类风湿因子等的非特异性干扰。其中，蛋白A对IgG的FC区具有较强的结合能力，能够实现对一大类自身抗体的清除，然而蛋白A与IgM型抗体的结合能力要显著弱于与IgG型抗体的结合能力，特异性差，同时在其固定化和保存过程中不稳定，易失活；热聚IgG作为吸附剂虽然可以对RF吸附，然而其吸附能力较差；采用疏水氨基酸(如以色氨酸或苯丙氨酸)分子为配基的吸附材料，其能够对许多自身抗体具有普遍的去除效果，然而使用该种材料作为吸附剂同样会对特异性IgM产生吸附。

因此，在临床检测中，迫切需要制备出一种制备工艺简便、效价高、特异性好的类风湿因子吸附材料。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗人IgG抗原的多克隆抗体及其制备方法，克服现有技术制备工艺复杂，抗体效价低，特异性差的缺陷，能够用于类风湿因子吸附剂的制备。

本发明的另一个目的是提供一种类风湿因子吸附剂，能够高效、特异性地吸附类风湿因子，排除其对血清中IgM测定的干扰。

为了实现本发明的目的，本发明一方面提供了一种抗人IgG抗原的多克隆抗体，其通过如下制备方法得到：

(1)制备人IgG抗原；

(2)用人IgG抗原进行动物免疫；

(3)从免疫后的动物体内取血；

(4)依次用饱和硫酸铵盐析法和亲和层析法对血清纯化，得到多克隆抗体。

在本发明一个优选的实施方式中，所述步骤(1)中通过盐析沉淀法、亲和层析法、电泳法、等电点沉淀法或离子交换法(如DEAE-纤维素、CM-纤维素、DEAE-葡聚糖凝胶、CM-葡聚糖凝胶)中的一种或多种制备人IgG抗原；优选的，通过盐析沉淀法或亲和层析法制备。其中，盐析沉淀法中盐选自硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠，优选的，选自饱和硫酸铵，pH为4.5-5.5，抽提温度为0-10℃。在不同的抗原提取过程中，所选用的溶剂的性质、pH值、离子强度、抽提温度等是提取成败的重要因素，需要经过筛选选择能够得到高纯度抗原的方法。

在本发明一个优选的实施方式中，提取人IgG抗原后，可通过透析或葡聚糖凝胶进行脱盐。

在本发明中，制备人IgG抗原的细胞可来自人血液，细胞的破碎按照本领域常规的方法进行，例如反复冻融法、超声破碎法、自溶法、酶处理法或表面活性剂处理法，可以根据实际需求进行选取，本发明对此不作限定。

本发明所述的步骤(2)中，所述的动物可以为本领域使用的制备多克隆抗体的动物，选自：小鼠、大鼠、豚鼠、兔、鸡、羊、马、猪、驴中的一种或两种以上，优选为兔、羊、豚鼠。所述免疫的方法选自皮下注射法、脾内注射法、静脉注射法、腹腔注射法等。步骤(2)免疫步骤中的免疫剂量可视具体动物种类而定，优选的免疫剂量为10-800μg/只/次。

在本发明一个优选的实施方式中，所述的步骤(2)包括：将步骤(1)得到的人IgG抗原的免疫原与弗氏完全佐剂等体积混合，充分乳化后对动物进行皮下多点注射，免疫剂量为每只动物每次10-800μg，初次免疫后每2-4周免疫1次，免疫次数≥3次。优选的，所述的初次免疫后每2周免疫1次，免疫次数为3-5次，更优选的免疫次数为3次。